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脑成纤维细胞说明书
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产品特点:
人脑成纤维细胞说明书加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
  脑成纤维细胞说明书的详细资料:

培养:
1.取出小鼠后沥干酒精,放入超净台内,固定在泡沫板上。
2.用镊子提起皮肤,用解剖剪剪开皮肤一个横切口,将皮肤向上撕开,然后剪开肌肉等,暴露出腹腔,在左侧找到脾脏,用弯头眼科镊取出脾脏,置于无菌培养皿中。
3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次,并剔除多余无用的组织。
4.将筛网置于平皿中,脾脏置于筛网上,用弯头镊镊住,轻轻在筛网上进行碾磨,同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。
5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中,离心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培养液,吹打混匀,取样计数。
7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中,轻轻摇晃混匀,在培养瓶上。

运输和保存:
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

产品名称

脑成纤维细胞说明书

英文名称

Human fibroblasts

规格

5×105cells


细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) =计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。

人参皂苷Rg2(标准品) 质量规格:HPLC≥98%,标准品 Ginsenoside Rg2 不吸水链霉菌 Streptomyces ahygroscopicus豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna

3-(三基硅基)-1-丙钠(>98.0%(T)) 质量规格:>98.0%(T) Sodium 3-(Trimethylsilyl)-1-propanesulfonate  IM-9(人外周血B淋巴细胞)RA, 大鼠星形胶质细胞

SB505124 质量规格:>98% SB-505124  细胞名称HT-29, 人结肠细胞

分子筛, 5 Å(40-60目,气相、液相色谱柱) 质量规格:40-60目,气相、液相色谱柱 Molecular sieves, 5 Å 月桂基盐胰蛋白胨肉汤/LST肉汤/LST Broth各种食品中大肠菌群近似值(MPN)测定250克国产/进口

新碱 订购|咨询 规格: 20mg 神经细胞分化相关蛋白AHNAK抗体 CA72-4 ELISA Kit 糖类抗原72-4(CA72-4)ELISA试剂盒

羊藿次苷I 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询 人金属蛋白1E(MT1E)ELISA试剂盒人96T0.47-30 ng/mL大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒,英文名:PLAUR/uPAR ELISA Kit

穿心莲内酯 订购|咨询 规格: 20mg 载脂蛋白A1抗体 ANP32E ELISA Kit 性富亮氨核蛋白32家族成员E(ANP32E)ELISA试剂盒

扁蓄苷(标准品) 质量规格:HPLC≥98%,标准品 Avicularin 苜蓿中华根瘤菌大丽花轮枝孢

毛蕊异黄苷 订购|咨询 规格: HPLC≥98%;20mg Bcl-2结合抑凋亡蛋白2抗体 uPAR ELISA Kit 尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)ELISA试剂盒

酰螺旋霉素(标准品) 质量规格:效价测定 Acetylspiramycin 自养黄色杆菌 Xanthobacter autotrophicus松口蘑 Tricholoma matsutake

二洛平 订购|咨询 规格: 100mg 人角化细胞富含脯氨蛋白(KPRP)ELISA试剂盒人96T0.78-50 ng/mL小鼠Ⅰ型胶原(COL1)ELISA试剂盒,英文名:COL1 ELISA Kit

吐温20 质量规格:CP Tween 20 过氧蛋白同源物(PXDN)重组蛋白英文名称:Recombinant Peroxidasin Homolog (PXDN)

黄柏(标准品) 质量规格:HPLC≥98%,标准品 Obacunone  植物杆菌 Lactobacillus plantarumSKOV3/Taxol-25, 人卵巢紫杉耐药细胞株

脑成纤维细胞说明书克林B CAS  规格: 50mg 订购|咨询

氨磷汀 CAS 112901-68-5 规格: 50mg 订购|咨询

甜茶 CAS  规格: 2.5g 订购|咨询

节裂角茴香 CAS  规格: 1g 订购|咨询

酸醇 CAS 51022-70-9 规格: 100mg 订购|咨询

地匹福林 CAS 64019-93-8 规格: 50mg 订购|咨询

兰索拉唑 CAS 103577-45-3 规格: 100mg 订购|咨询

旋复花 CAS  规格: 2g 订购|咨询

哈巴苷 CAS 1835927 规格: 20mg 订购|咨询

洛伐他汀 CAS 75330-75-5 规格: 100mg 订购|咨询

维生素BT CAS  规格: 100mg 订购|咨询

比阿培南 CAS  规格: 50mg 订购|咨询

羟嗪 CAS  规格: 100mg 订购|咨询

延胡索乙素 CAS  规格: 20mg 订购|咨询

实验事项:
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2.   加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

产品相关关键字: 脑成纤维细胞 5×105cells
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