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293(人胚肾细胞)说明书
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产品特点:
293(人胚肾细胞)说明书在冷冻保存之前,应观察细胞生长是否良好 且存活率高,冻存的细胞密度为80 – 90 %冷冻前检测细胞是否保有其特有性质,例如是否有杂细胞或者支原体等。
  293(人胚肾细胞)说明书的详细资料:

本公司代理ATCC细胞,提供售前售后一条龙服务,若要获取详细的说明书或价格信息,请咨询在线客服。

产品名称英文名称规格
293(人胚肾细胞)说明书293 (human embryonic kidney cells)5×106cells

产品特点:
1、 使用方便:不需昂贵设备。
2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。

细胞培养技巧:
一、冻存时的注意事项:
1. 在冷冻保存之前,应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高,冻存的细胞密度为80 – 90 %
2. 冷冻前检测细胞是否保有其特有性质,例如是否有杂细胞或者支原体等。
3. 使用的DMSO 应为试剂级等级,以5~10 ml 小体积分装,4 度避光保存,勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级,以高压蒸汽
灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。
4. 冷冻保存的细胞浓度:
4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,细胞浓度不要太高,某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。
4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6,依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 % DMSO,若是不确定细胞之冷冻条件,在做冷冻保存之同时,亦应作一个backup culture,以防止冷冻失败。 
冻存的步骤:
1. 冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。
2. 使用ScienCell冻存液 混合均匀,置于室温下待用。
3. 依细胞传代培养的操作,收集培养好的细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。
4. 离心,去除上清液,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 10^6 cells/ml,混合均匀,
分装于已标示完全之冷冻保存管中,1 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。
5. 冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 度10 分钟→ -20 度 30 分钟→ -80 度16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。
6. 冷冻保存方法2: 冷冻管置于已设定程序之等速降温机中,再放入液氮槽中。程序为: program 7: HB CELL 。
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
 

APOBEC3C 载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物3C抗体
Apolipoprotein CI/APOC1 载脂蛋白C1抗体
Apolipoprotein CII/APOC2 载脂蛋白C2抗体
APOL1 载脂蛋白L1抗体
APOL4 载脂蛋白L4抗体
APOL5 载脂蛋白L5抗体
ApoM 载脂蛋白M抗体
Apolipoprotein O 载脂蛋白O抗体
APPBP1 β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1抗体
Aprataxin 共济失调性眼球运动功能丧失相关蛋白AOA1抗体
APRG1 三号染色体开放阅读框抗体
APRT 腺嘌呤磷酸核糖转移酶抗体
phospho-AQP2 (Ser256) 磷酸化水通道蛋白2抗体
ARF1 ADP核糖基化因子1抗体
ARA9 乙型肝炎病毒X相关蛋白2抗体
ARF5 ADP核糖基化因子5抗体
ARFBP1 ADP核糖基化因子结合蛋白抗体
ARFGAP3 ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1抗体
ARFRP1 ADP核糖基化因子相关蛋白1
Argininosuccinate Lyase 琥珀酸裂解酶抗体
Arginyl tRNA synthetase 精氨酰tRNA合成酶抗体
Argonaute 3 真核翻译起始因子2C3抗体
Argonaute 4 真核翻译起始因子2C4抗体
ARHGAP15 Rho GTP酶激活蛋白15抗体

氨基酰化酶1抗体 ADH ELISA Kit 乙醇脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒
脂肪甘油三酯脂酶抗体 AD ELISA Kit 乙胺呋酮(AD)ELISA试剂盒
磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体 PL ELISA Kit 胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒
双调蛋白抗体 Pancreastatin ELISA Kit 胰抑制素(Pancreastatin)ELISA试剂盒
磷酸化水通道蛋白2抗体 PK ELISA Kit 胰激肽原酶(PK)ELISA试剂盒
粘附相关激酶抗体 GLP2R ELISA Kit 胰高血糖素样肽2受体(GLP2R)ELISA试剂盒
磷酸化粘附相关激酶抗体 GLP2 ELISA Kit 胰高血糖素样肽2(GLP2)ELISA试剂盒
磷酸化蛋白激酶B抗体 GLP1R ELISA Kit 胰高血糖素样肽1受体(GLP1R)ELISA试剂盒
磷酸化水通道蛋白2抗体 GLP-1 ELISA Kit 胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA试剂盒
磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体 GC ELISA Kit 胰高血糖素(GC)ELISA试剂盒
磷酸化蛋白激酶B抗体 PP ELISA Kit 胰多肽(PP)ELISA试剂盒
磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体 Amylin ELISA Kit 胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒
磷酸化活化转录因子4抗体 PAMY ELISA Kit 胰淀粉酶(PAMY)ELISA试剂盒
磷酸化雄激素受体抗体 IA-2A ELISA Kit 胰岛细胞抗原2抗体/蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)ELISA试剂盒
磷酸化雄激素受体抗体 ICA ELISA Kit 胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒
293(人胚肾细胞)说明书磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗体 IAA ELISA Kit 胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒
磷酸化蛋白激酶B抗体 PI ELISA Kit 胰岛素原(PI)ELISA试剂盒
磷酸化活化复制因子2抗体 INSL3 ELISA Kit 胰岛素样因子3(INSL3)ELISA试剂盒
凋亡相关蛋白3抗体 IGFBP7/MAC25/PSF ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)ELISA试剂盒
自噬相关蛋白18抗体 IGFBP-5 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)ELISA试剂盒
自噬相关蛋白4A抗体 IGFBP-4 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒

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