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蛋白A纯化预装柱
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蛋白A纯化预装柱公司正在出售的产品:0.156-10 ng/mL 人Ⅲ型脱碘 ELISA试剂盒 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Serpin B5 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A2/B1 0.312-20 ng/mL 肉毒杆菌(E/F型)
  蛋白A纯化预装柱的详细资料:

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称:蛋白A纯化预装柱

英文名称:Protein A 4FF Chromatography Column, 1ML

产品规格:1ml

产品货号:BJ-01X6417

本品Protein A 4FF Chromatography Column,1ml是一种装填了Protein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格1ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如?KTA 等,方便客户操作。

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于的细胞壁表面蛋白,与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG,可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA 和Protein G结合性能不太一样(详见附录1)。

本品使用的是基因改造后的蛋白A,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,Protein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein A为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

基质(Matrix):高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand):重组蛋白A

孔径(Bead size):45-165μm

大流速(Flowmax):0.3MPa,3bar

储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity):>40mg human IgG/ml 基质

pH范围:3-12

储存条件:4℃,有效期两年

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Arisaema cum bile染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

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Influenza Virus B 乙型流感病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Paranavirus(PARV)帕腊南病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Bundibugyo Ebola Virus(BDBV)本迪布焦型埃博拉病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Caulis bambusae in taenia竹茹染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

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P16蛋白表达ELISA定量检测试剂盒  25次

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改良卵黄琼脂基础 英文名称:Mannitol-Egg-Yolk-Polymycin Agar Base,Modified 产品规格:250g

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