中文名称:MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒 英文名称:MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit 产品规格:500次 产品货号:BJ-01X6321 MTS是一种新型甲臜化合物,和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜,通过测定甲臜的光谱吸收,进而可以测定细胞的增殖情况。
产品特点: 1.本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂,主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂,溶液的稳定性强,反应的灵敏度高。 2.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。 3.无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。 4.与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。 5.操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。 储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期半年。 使用效果: 96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104),37℃,5% CO2细胞培养箱培养24小时,加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间,每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
TM3(小鼠睾丸间质细胞) 5×106cells/瓶×2 TSCCa(人舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2 U-2 OS(人骨肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 U251(人胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 U-87 MG(人神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 U-937(人组织细胞淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 V79(仓鼠肺细胞) 5×106cells/瓶×2 VCaP(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 Vero(非洲绿猴肾细胞) 5×106cells/瓶×2 WI-38(人胚肺细胞) 5×106cells/瓶×2 WISH(人羊膜细胞) 5×106cells/瓶×2 Y1(Y-1) (小鼠肾上腺皮质细胞) 5×106cells/瓶×2 YAC-1(小鼠淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 ZR-75-1(人乳腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 ZR-75-30(人乳腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 16HBE(人支气管上皮样细胞) 5×106cells/瓶×2 801-D (人巨细胞性肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 A2(人腺样囊性癌细胞) 5×106cells/瓶×2 A-427(人肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 A-498(人肾癌细胞) 5×106cells/瓶×2 A875(人黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 肺α/β水解酶蛋白3抗体 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白F亚基3抗体 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A亚基5抗体 ADCK1蛋白抗体 酰基结合结构域蛋白4抗体 α/β水解酶4抗体 ADCK2蛋白抗体 乙醛脱氢酶16家庭A1抗体 粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体 乙醇脱氢酶1抗体 δ氨基乙酰丙酸脱水酶抗体 肌侧索硬化症相关蛋白4抗体 α2巨球蛋白抗体 ACCSL蛋白抗体 甲胎蛋白抗体 β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体 星形肌动蛋白抗体 系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体 磷酸化系统性红斑狼疮先关蛋白TREX1抗体 磷酸化系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体 MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒头相关蛋白复合体AP-2μ链1抗体 磷酸化接头相关蛋白复合体AP-2μ链1抗体 膜粘连蛋白7抗体 操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
|