冻存的步骤: 1. 冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。 2. 使用ScienCell冻存液 混合均匀,置于室温下待用。 3. 依细胞传代培养的操作,收集培养好的细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 4. 离心,去除上清液,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 10^6 cells/ml,混合均匀, 分装于已标示*之冷冻保存管中,1 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。 5. 冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 度10 分钟→ -20 度 30 分钟→ -80 度16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 6. 冷冻保存方法2: 冷冻管置于已设定程序之等速降温机中,再放入液氮槽中。程序为: program 7: HB CELL 。 本公司代理ATCC细胞,提供售前售后一条龙服务,若要获取详细的说明书或价格信息,请咨询在线客服。 产品名称 | 英文名称 | 规格 | NCI-H358(人非小细胞肺癌细胞)规格 | NCI-H358 (human non small cell lung cancer cell) | 5×106cells |
产品特点: 1、 使用方便:不需昂贵设备。 2、 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。 3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。 4、 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。 6、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。 7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。 细胞培养技巧: 一、冻存时的注意事项: 1. 在冷冻保存之前,应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高,冻存的细胞密度为80 – 90 % 2. 冷冻前检测细胞是否保有其*性质,例如是否有杂细胞或者支原体等。 3. 使用的DMSO 应为试剂级等级,以5~10 ml 小体积分装,4 度避光保存,勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级,以高压蒸汽 灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。 4. 冷冻保存的细胞浓度: 4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,细胞浓度不要太高,某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。 4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6,依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 % DMSO,若是不确定细胞之冷冻条件,在做冷冻保存之同时,亦应作一个backup culture,以防止冷冻失败。 培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 小鼠C型钠尿肽(CNP)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠β-骨胶原交联(β-CTx)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠II型胶原(COL2)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠cAMP反应元件结合蛋白(CREB)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠c-myc癌基因产物(c-myc)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠周期素依赖性激酶5(CDK5)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠周期素依赖性激酶9(CDK9)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠周期素依赖性激酶抑制因子1B(CDKN1B)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠细胞周期素D1(CCND1)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠细胞周期素D2(CCND2)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠细胞周期素D3(CCND3)酶联免疫吸附测定试剂盒 小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CYPA)酶联免疫吸附测定试剂盒 NCI-H358(人非小细胞肺癌细胞)规格和厚朴酚 CAS 35354-74-6 规格: 20mg 订购|咨询 扶桑甾醇 CAS 规格: 10mg 订购|咨询 异绿原酸A CAS 2450-53-5 规格: 20mg 订购|咨询 β-谷甾醇 CAS 83-46-5 规格: 20mg 订购|咨询 丹参Ⅰ CAS 568-73-0 规格: 20mg 订购|咨询 华蟾它灵 CAS 1108-68-5 规格: 10mg 订购|咨询 长春胺 CAS 1617-90-9 规格: 20mg 订购|咨询 苍术苷A CAS 126054-77-1 规格: 20mg 订购|咨询 白花前胡乙素 CAS 81740-07-0 规格: 20mg 订购|咨询 新补骨脂异黄 CAS 41060-15-5 规格: 20mg 订购|咨询 青藤碱 CAS 115-53-7 规格: HPLC≥98%,20mg/vial 订购|咨询 诺米林 CAS 1063-77-0 规格: HPLC≥98%;20mg/vial 订购|咨询 薄荷脑 CAS 89-78-1 规格: HPLC≥98%,20mg/vial 订购|咨询 黄杞苷 CAS 572-31-6 规格: HPLC≥98%,20mg/vial 订购|咨询 |