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PLC/PRF/5(人肝癌亚力山大细胞)说明书
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产品特点:
PLC/PRF/5(人肝癌亚力山大细胞)说明书加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
  PLC/PRF/5(人肝癌亚力山大细胞)说明书的详细资料:

培养:
1.取出小鼠后沥干酒精,放入超净台内,固定在泡沫板上。
2.用镊子提起皮肤,用解剖剪剪开皮肤一个横切口,将皮肤向上撕开,然后剪开肌肉等,暴露出腹腔,在左侧找到脾脏,用弯头眼科镊取出脾脏,置于无菌培养皿中。
3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次,并剔除多余无用的组织。
4.将筛网置于平皿中,脾脏置于筛网上,用弯头镊镊住,轻轻在筛网上进行碾磨,同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。
5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中,离心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培养液,吹打混匀,取样计数。
7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中,轻轻摇晃混匀,在培养瓶上。

运输和保存:
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

产品名称

PLC/PRF/5(人肝癌亚力山大细胞)说明书

英文名称

PLC/PRF/5 (human hepatoma cell Alexander)

规格

5×106cells


细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) =计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。

牛蒡子苷;Arctiin 规格: 20mg 订购|咨询 GoldCassette-HIS/HIS重组标签蛋白快速检测试剂盒(精装)2次2次、10次

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O- 订购|咨询 规格: 20mg/支 角质素抗体 TDH ELISA Kit L-苏氨脱酶(TDH)ELISA试剂盒

山椒子;Zeylenone 规格: 10mg 订购|咨询 NCI-H1703(人肺鳞细胞)5×106cells/瓶×2

阿魏钠;Sodium ferulic 订购|咨询 规格: 20mg 3号染色体开放阅读框15抗体 CEP350 ELISA Kit 中心体蛋白350kDa(CEP350)ELISA试剂盒

芸苔素内酯 订购|咨询 规格: HPLC≥98%;20mg 化氨基末端激酶1/2/3抗体 PODN ELISA Kit Podocan蛋白(PODN)ELISA试剂盒

褪黑素 订购|咨询 规格: 20mg 人分泌型免疫球蛋白A IL4I1 ELISA Kit 白介素4诱导蛋白1(IL4I1)ELISA试剂盒

盐水苏碱;Stachydrine hy 规格: 20mg 订购|咨询 NCI-H838(人非小细胞肺细胞)5×106cells/瓶×2

盐达克罗宁(标准品) 质量规格:含量测定 Dyclonine hydrochloride COS-7(非洲绿猴SV40转化的肾细胞)中慢生华癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii

日蟾毒它灵;Gamabufalin 规格: 20mg 订购|咨询 5%糖发酵管BR20支国产/进口

银杏内酯B 订购|咨询 规格: 20mg 化低密度脂蛋白受体相关蛋白1抗体 COL4α1 ELISA Kit Ⅳ型胶原α1(COL4α1)ELISA试剂盒

强力霉素海克盐 质量规格:美国进口 Doxycycline Hyclate 人腺腺细胞英文名称:MDA-MB-415

龟对照药材 订购|咨询 规格: 1g 15号染色体开放阅读框58抗体 NOP58 ELISA Kit 核仁蛋白58(NOP58)ELISA试剂盒

重楼皂苷II 订购|咨询 规格: 20mg 锚蛋白重复结构域蛋白32抗体 HSP20 ELISA Kit 热休克蛋白20(HSP20)ELISA试剂盒

PLC/PRF/5(人肝癌亚力山大细胞)说明书Phospho-PBK/TOPK(Thr9)  磷酸化PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶抗体 规格: 0.1mlEphA7/Eph receptor A7  酪氨酸蛋白激酶受体A7抗体 规格: 0.2ml

NIT1  水解酶1抗体 规格: 0.2mlFAM61B/LSM14B  FAM61B蛋白抗体 规格: 0.2ml

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG 规格: 1mgRCBTB1/CLLD7  鸟嘌呤核苷酸交换因子抗体 规格: 0.2ml

phospho-PTPN7(Ser93)  磷酸化非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗体 规格: 0.1mlPhospho-c-Kit(Tyr703)  磷酸化原基因c-kit抗体 规格: 0.1ml

BACE1/ASP2  β分泌酶抗体 规格: 0.1mlSA1/Nuclear protein stromal antigen 1  粘结蛋白SA1抗体 规格: 0.2ml

Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  罗丹明标记的小鼠抗兔IgM 规格: 0.1mlABI1  ABI1/SSH3BP1蛋白抗体 0.1ml

Phospho-SIRT1(Ser47)  磷酸化沉默调节蛋白1抗体 规格: 0.1mlPhospho-Troponin I(Ser23/24)  磷酸化钙调节蛋白-1抗体 规格: 0.1ml

FBXO38  F-box蛋白38抗体 规格: 0.2mlCD3/CD3-ε  CD3抗体 规格: 0.1ml

NNT  烟酰胺核苷酸转酶抗体 规格: 0.2mlHECA  HECA蛋白抗体 规格: 0.2ml

Rabbit Anti-rat IgM/Bio  生物素标记的兔抗大鼠IgM 规格: 0.1mlPhospho-HSL (Ser865)  磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体 规格: 0.1ml

Jagged 2  Notch配体Jagged 2蛋白抗体 规格: 0.2mlMouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的小鼠抗兔IgG 规格: 0.1ml

C11orf24  11号染色体开放阅读框24抗体 规格: 0.2mlphospho-DAXX (Ser517)  磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体 规格: 0.1ml

CNTROB  易感基因2相互作用蛋白抗体 规格: 0.2mlPNPLA1  含patatin样磷脂酶1抗体 规格: 0.2ml

DcR3/TR6  诱捕受体3抗体 规格: 0.1mlCadherin 8  钙粘附蛋白8抗体 规格: 0.2ml

实验事项:
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2.   加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

产品相关关键字: PLC/PRF/5 人肝癌亚力山大细胞 5×106cells
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