基因的表达受到多种转录因子及其相关蛋白的调控， 基因表达调控常用研究方法包括转录因子结合实验、 电泳迁移阻滞实验、 酵母单杂交系统和染色质免疫共沉 淀 技 术。尽管这4种方法均可以鉴定转录因子在DNA 中的结合位点， 但前3种方法需要将DNA与转录因子分离到体外进行实验， 无法真实地反映在不同生理状态下， 转录因子与相应靶基因识别与结合的真实情况。

ChIP技术通过甲醛交联， 将某一时刻DNA与转录因子之间的作用情况“ 快照” 下来， 可真实、 完整地反映特定时刻下， 目的蛋白在全基因组序列中的结合情况， 因此，近年来该技术得到越来越广泛的应用。ChIP研究多以细胞系或从组织分离培养所得的细胞为材料， 但离体培养的细胞无法*模拟体内细胞相应的生理状态， 无法排除细胞培养过程中对基因表达及其调控产生的影响。已有直接将组织作为elisa试剂盒

ChIP材料、 避免细胞培养可能产生的潜在影响的报道。目前有关组织ChIP方法远不及以细胞 ChIP方法成熟， 相关研究报道也较少， 同时急需进一步研究*适合不同组织的ChIP方法。

ChIP技术通过甲醛交联固定结合在染色质上的蛋白， 经细胞裂解、 染色质断裂， 用结合有相应抗体的沉降珠捕获并分离目的蛋白DNA复合物， zui后经反交联、 纯化后， 得到与目的蛋白结合的 DNA片段。目前大多数利用 ChIP技术对DNA与蛋白之间相互作用进

行的研究均是以细胞为材料， 将活体组织作为ChIP材料的报道较少， 尚未有以乳腺组织为 ChIP材料的报道。与脾脏等组织不同， 乳腺组织中含有大量乳腺纤维， 致使样品均一化处理时难以分离得到呈单一状分布的细胞， 且细胞容易破损， 回收率低。泌乳期乳腺细胞裂解后， 裂解液中含有大量的乳脂和乳蛋白， 严重影响杂交效率。超声法断裂染色质过程中易产生积热、 易导致反交联和蛋白质变性， 因此对超声波仪的温控要求较高。

针对以上问题， 研究人员以Stat为目的蛋白对传统的组织染色质免疫共沉淀方法进行了改进， 寻找适合乳腺组织的染色质免疫共沉淀方法。

研究人员省略组织均一化步骤、 用酶切 超声法代替超声法进行染色质片段化、 在细胞裂解和酶切步骤间增加洗涤步骤。结果显示， 与脾脏组织相比， 乳腺组织不适合进行组织均一化处理。酶切 超声法比超声法更适于对乳腺组织进行染色质片段化。采用改进后的 ChIP方法获得的DNA样品中， 靶序列得到显著的富集， 所得的DNA样品能够满足测序（ChIP Seq） 要求。结果说明， 改进后的方法适用于乳腺组织染色质免疫共沉淀。elisa试剂盒

研究人员认为，利用改进后的方法， 将乳腺组织经抗体与磁珠耦合、 组织处理、 交联、 酶切 超声裂解、 孵育、洗涤、 反交联和纯化共8步处理后， 经QPCR方法证实， 得到了富集有 Stat靶序列片段的DNA片段， 且样品质量达到华大公司对ChIP样品的测序要求。测序分析结果显示， 利用改进后的ChiP方法获得的样品数据背景干净、 峰形显著、 重复性高， 可满足ChIP Seq要求。elisa试剂盒

这些结果说明， 改进后的方法适用于乳腺组织染色质免疫共沉淀， 该方法为研究乳腺基因表达调控奠定了基础。