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转氢酶1(比色法)测试盒TH-1活性计算
点击次数:63 更新时间:2024-03-18

一、TH-1活性计算

1、用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

 TH-1活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T=149×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=74.5×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.149×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:APADPH摩尔消光系数,6.7×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,0.5mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

2、用96孔板测定的计算公式如下:

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

 TH-1活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T=298×ΔA÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=149×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.298×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:APADPH摩尔消光系数,6.7×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,0.5mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。


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