中文名称：COX-1抑制剂(SC-560)

英文名称：SC-560

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X8531

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

大鼠 EFNB1 基因全长ORF克隆细DNA损伤彗星荧光检测试剂盒  20次

大鼠 EFNA5 基因全长ORF克隆细DNA损伤彗星*荧光检测试剂盒  20次

大鼠 FIGF 基因全长ORF克隆酵母DNA损伤彗星荧光检测试剂盒  20次

大鼠 VEGFC 基因全长ORF克隆酵母DNA损伤彗星*荧光检测试剂盒  20次

大鼠 FLT1 基因全长ORF克隆果蝇DNA损伤彗星荧光检测试剂盒  20次

大鼠 EGFR 基因全长ORF克隆细胞DNA损伤彗星荧光检测试剂盒  20次

大鼠 INSR 基因全长ORF克隆荧光原位杂交彗星检测试剂盒  20次

大鼠 TFRC 基因全长ORF克隆检测试剂盒  方法

大肠杆 (Shiga toxin) STX2 基因全长ORF克隆10150  比色

大鼠 PGC 基因全长ORF克隆100165001650023  荧光、比色

大鼠 MS4A2 基因全长ORF克隆100161012410112  荧光、比色、化学发光

COX-1抑制剂(SC-560)PGT/Slco2a1  溶质载体蛋白家族21成员2抗体 0.2mlPhospho-TH (Ser31)  磷酸化酪羟化抗体 规格: 0.1ml

DENND2C  MAP激激活死亡域蛋白2C抗体 规格: 0.2ml

KATNA1/Katanin p60 A1  剑蛋白p60亚基A1抗体 规格: 0.2ml

SFR19  剪接因子，/丝丰富19 规格: 0.2mlPhospho-SATB1 (Ser47)  磷酸化核基质结合区结合蛋白1抗体 规格: 0.1ml

MAL  MAL蛋白抗体 规格: 0.1ml

VIP  管活性肠肽抗体 规格: 0.1ml

FLG  丝聚合蛋白/中间丝蛋白抗体 规格: 0.1mlhuman Fibrinogen  羊抗体 0.1ml

Rabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的兔抗亲和素 规格: 0.1ml

phospho-CDKN2A/P16 (Ser8)  磷酸化抑基因p16抗体 规格: 0.1ml

ALAS1/ALAS-H  5-氨基乙酰丙酸合1抗体 规格: 0.2ml

GARB1/GABAR  γ1氨基丁酸受体β1抗体 规格: 0.1ml

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)