中文名称：CDK2抑制剂(CVT-313)

英文名称：CVT-313

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7861

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人 IL17Rb 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪ELISA试剂盒

人 CD47 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪组织因子(TF)免疫试剂盒进口、组装

人 CD44 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪组织型纤溶原激活剂(t-PA)免疫试剂盒进口、分装

人 NLGN1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪组胺(HIS)免疫试剂盒现货供应

人 GRN 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪转铁蛋白受体(TFR)免疫试剂盒*直销

人 EpCAM / TROP1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪转铁蛋白(TF)免疫试剂盒进口、组装

人 Syk 转录变体1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪转录因子AP-1 免疫试剂盒进口、分装

人 GranzymeH 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪转化生长因子β1(TGF-β1)免疫试剂盒现货供应

人 ICAM-2 / CD102 转录变体5 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ)免疫试剂盒*直销

人 DCN / Decorin 转录变体A1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ)免疫试剂盒进口、组装

人 S100A1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签猪主要急性期蛋白(MAP)免疫试剂盒进口、分装

CDK2抑制剂(CVT-313)酸性固绿染色液  2×50ml  10L Tricine-SDS-PAGE阴极电泳液（干粉） Tricine SDS-PAGE Anode Buffer 常温保存

精子核蛋白染色液(磷钨酸法)  25T|50T  2 ug pYES3 pYES3 低温运输，-20℃保存

软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5)  2×50ml  50次 柱式水样DNAout Column Water DNAOUT 常温

软骨染色液(阿利新蓝法,pH1.0)  2×50ml  2 ug pET-23(+)-TEV pET-23(+)-TEV 低温运输，-20℃保存

Unna碱性美蓝染色液  100ml  LEB肉汤 Listeria Enrichment Broth 250g

透明软骨染色液(Unna碱性美蓝法)  2×50ml  1瓶 3T3细胞株 3T3 低温运输和保存

精子核DNA染色液(AO法)  20T  1个 陶瓷研钵 （直径75 mm）  常温

软骨染色液(番红O法)  2×100ml  50 T 微量丙二醛测试盒/脂质过氧化物测试盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

改良番红O-固绿软骨染色液  5×50ml|5×100ml  250mL MES Buffer,1.0M,pH5.0  MES Buffer,1.0M,pH5.0  常温保存

Goldner三色染色液  6×50ml|6×100ml  100次 哺乳动物种属鉴定PCR Mix(线粒体CO1基因） Animal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

亚甲基蓝-酸性品红染色液  2×50ml|2×100ml  2 ug pMAL- c2x pMAL- c2x 低温运输，-20℃保存

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)