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B-Raf抑制剂(SB-590885)
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B-Raf抑制剂(SB-590885)公司正在出售的产品:TSHB(2T11) 促甲状素单克隆抗体 规格: 0.1mlRNF34 环指蛋白34抗体 规格: 0.2mlC1orf31 1号染色体开放阅读框31抗体 规格: 0.2mlTRP2 酪相关蛋白2抗体 规格: 0.1mlphospho-p53BP1(Ser25/29) 磷酸化p53结合蛋白1抗体 规格: 0.1ml
  B-Raf抑制剂(SB-590885)的详细资料:

中文名称:B-Raf抑制剂(SB-590885)

英文名称:SB-590885

产品规格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

产品货号:BJ-01X8455

SB-590885是一种有效的B-Raf抑制剂,Ki值为0.16nM;对其选择性是对c-Raf的11倍多。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

CAS号:405554-55-4

分子量:453.54

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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B-Raf抑制剂(SB-590885)2 ug pBAD/Myc-His A pBAD/Myc-His A 低温运输,-20℃保存

5次 96孔板血液DNAout(真空法) 96 Microwell Plate Blood DNAOUT 常温

2 ug pEF1/myc-His B pEF1/myc-His B 低温运输,-20℃保存

MRS琼脂 MRS Agar 250g

1g 3,3’,5,5’- 四甲基联苯胺二盐酸 3,3’,5,5’-Tetramethyl Benzidine Dihydrochloride (TMB 2HCl) 4-8℃保存

50T 植物源性成分PCR检测试剂盒  低温运输,-20℃保存

50次 NF-κB激活-核转运检测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

10mL Hygromycin B Solution  Hygromycin B Solution  常温保存

9mL 即用型高保真PCR试剂盒 Instant HiFi PCR Mix -20℃保存

2 ug pLV-cGFPI pLV-cGFPI 低温运输,-20℃保存

高盐度脑心浸液肉汤  2ml*20支

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

 


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