培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数: 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | Bcl-2抑制剂((S)-Gossypol acetic acid) | (S)-Gossypol acetic acid | 1mL(10mM)|10mg|50mg | BJ-01X8588 |
商品详细介绍: (S)-Gossypol acetic acid是Bcl-2抑制剂,有效诱导过表达Bcl-2或Bcl-xL的Jurkat细胞死亡,IC50分别为18.1μM和22.9μM. 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1189561-66-7 别名:(S)-(+)-Gossypol acetic acid 纯度:98.80% 分子量:578.61 储存条件:-20℃避光保存于氩气中。 |
实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点: 1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 人 VSIG4 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签载玻片细胞CDK6蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 人 ITGAV 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签冰冻切片组织CDK6蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 雪貂 IFNG 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签石蜡切片组织CDK6蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 人 AMD1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签载玻片细胞CDK6蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次 雪貂 CD3E 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签冰冻切片组织CDK6蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次 人 Follistatin 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签石蜡切片组织CDK6蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次 人 IDH1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签细胞CDK6蛋白表达比色法定量检测试剂盒 10/50 次 人 SPRY1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带HA标签细胞CDK6蛋白表达荧光定量检测试剂盒 10/50 次 人 CR2 / CD21 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签CDK6蛋白表达西方杂交分析试剂盒 5次 人 HSP90AA1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签CDK6蛋白免疫共沉淀分析试剂盒 5次 甲型流感 H3N2 (A/Memphis/1/68) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全长ORF克隆 (密码子优化)(表达载体), 无标签CDK6蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 25次 Bcl-2抑制剂((S)-Gossypol acetic acid)Bone Sialoprotein/BSP 骨涎蛋白 0.1ml Rabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗猴IgG 规格: 0.1ml AMACR/P504S α-甲基酰基辅A消旋抗体 规格: 0.1ml Lysozyme 溶菌抗体 规格: 0.1ml C1orf187 1号染色体开放阅读框187抗体 规格: 0.2mlCD45/B220 白细胞共同抗原抗体 规格: 0.1ml Plexin B2 神经丛蛋白B2抗体 规格: 0.2ml CD33L/OBBP1 CD33L抗体 规格: 0.2ml 4EBP2 eIF4E结合蛋白2抗体 0.1mlDog IgM/PE PE标记的兔抗犬IgM抗体 规格: 0.1ml DPPL1 磷脂酸磷酸HTPAP抗体 规格: 0.2ml TRIM3/RNF22 环指蛋白22抗体 规格: 0.2mlPGBD1/Cerebral protein 4 脑蛋白4抗体 规格: 0.2ml EBNA1/EBV Nuclear Antigen EB毒核抗原1抗体 规格: 0.2ml
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