产品参数： 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | PKH67细胞增殖与毒性检测试剂盒 |
| 500T | BJ-01X6514 |
商品详细介绍： 荧光染料PKH67 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞，通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞。对细胞毒性较小，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，有着强而稳定的绿色荧光。经PKH67标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。 在细胞分裂增殖过程中，PKH67的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。PKH67标记细胞的荧光非常均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，PKH67标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次(1/2的荧光强度)，二次(1/4的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。PKH67可检测分裂次数多达六次甚至更多。 除了用于细胞增殖检测，PKH67 还可以用于细胞的体外盒体内示踪，标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注入体内，可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。 PKH67标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67 毒性较小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。 PKH67标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。 PKH67标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=490 nm,λem=502 nm。 储存条件：-20℃避光保存。 |
实验报告： 一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 培养操作步骤 ： 1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
 实验要点及说明： 1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点： 1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 Campylobacter laridis海鸥弯曲杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Bacillus methylotrophicus甲基营养型芽孢杆染料法qPCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 1-3天 Influenza Virus A N3（AIV-N3）甲型流感（）病毒N3亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Fructus chaenomelis木瓜PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Aspergillus fumigatus烟曲霉LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽传染性支气管炎病毒Conn型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Parainfluenza Virus(PIV)副流感病毒通用RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Influenza Virus A甲型流感（）病毒H3N2亚型 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Radix morindae officinalis巴戟天探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Mud Crab Dicistrovirus (MCDV)青蟹双顺反子病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Hazara Virus哈扎拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Radix ephedrae麻黄根探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 PKH67细胞增殖与毒性检测试剂盒冬凌草甲素 ： 28957-04-2 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询 人5核苷酸(5-NT)免疫试剂盒进口、组装 小鼠胰激肽原(PK)免疫试剂盒进口、分装 牛成纤维细胞生长因子21(FGF21)免疫试剂盒*直销 小鼠基质金属蛋白抑制因子2(TIMP-2)免疫试剂盒现货供应 猴子补体蛋白4(C4)免疫试剂盒进口、分装 豚鼠肾素(Renin)免疫试剂盒进口、组装 大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫试剂盒*直销 山羊促卵泡素(FSH)免疫试剂盒*直销 大鼠蛋白(PP)免疫试剂盒进口、组装 人细小病毒B19(B19V)抗体(IgM)免疫试剂盒进口、分装
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