细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 中文名称:PDGFR抑制剂(AC710) 英文名称:AC710 产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 产品货号:BJ-01X8333 AC710是有效的PDGFR抑制剂,对FLT3,CSF1R,KIT,PDGFRα和PDGFRβ的Kd值分别为0.6,1.57,1,1.3,1.0。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1351522-04-7 纯度:99.89% 分子量:562.7 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |

细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 小鼠 KLRC1 基因全长ORF克隆猴精1(ARG1)免疫试剂盒进口、组装 小鼠 CXCR2 基因全长ORF克隆猴甲状腺素(T4)免疫试剂盒进口、分装 小鼠 SPOCK1 基因全长ORF克隆猴环腺苷(cAMP)免疫试剂盒现货供应 小鼠 MAP3K13 基因全长ORF克隆猴环鸟苷(cGMP)免疫试剂盒*直销 小鼠 BBS7 基因全长ORF克隆猴骨形态发生蛋白受体2型(BMPR2)免疫试剂盒进口、组装 小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 基因全长ORF克隆猴甘肽S转移A1(GSTA1)免疫试剂盒进口、分装 小鼠 THOP1 基因全长ORF克隆猴肝炎病毒细胞的受体1/肾损伤分子1/KIM1(HAVCR1)免疫试剂盒现货供应 小鼠 EPHA1 基因全长ORF克隆猴分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)免疫试剂盒*直销 小鼠 CDC37 基因全长ORF克隆猴催乳素(PRL/LTH)免疫试剂盒进口、组装 小鼠 MAPK14 基因全长ORF克隆猴促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒进口、分装 小鼠 INHBE 基因全长ORF克隆猴促肾上皮质激素释放激素(CRH)免疫试剂盒现货供应 PDGFR抑制剂(AC710)乙醇酸氧化酶(GO)检测试剂盒(乙醇酸微板法) 100T 吖啶黄素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*5 乙醇酸氧化酶(GO)检测试剂盒(乙醇酸比色法) 50T 100mg 5- 溴 -4- 氯 -3- -β-D- 半乳糖苷 X-gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside) -20℃保存 TBA溶液 50ml|100ml 500支 1.5 mL RNase-free 离心管 常温 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法) 50T|100T 250 T 过氧化氢定量分析试剂盒(水兼容性) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA荧光法) 50T|100T 50mL Manganese Chloride Solution(溶液),1M Manganese Chloride Solution,1M 常温保存 植物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法) 50T|100T 0.5mL NTP溶液,10 mM NTP Solution,10 mM -20℃保存 总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(NBT核黄素微板法) 100T 2 ug pMAL- c4x pMAL- c4x 低温运输,-20℃保存 总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(NBT核黄素比色法) 50T|100T 气单胞菌培养基添加剂 5支 超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法) 50T 1瓶 PC-12(未分化)细胞株 PC-12(未分化) 低温运输和保存 羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton微板法) 100T 叠氮钠葡萄糖肉汤 Azide Dextrose Broth 250g 羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton比色法) 50T 25g 十六烷基基 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室温干燥保存
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