操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。 8、结果分析 a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称：吖啶橙-EB双染色试剂盒 英文名称：Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit 产品规格：50ml*2|250ml*2 产品货号：BJ-01X6478 橙能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构;早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品AO、EB溶液浓度分别为100ug/ml，所含稳定剂不影响实验效果。 使用方法：(仅供参考) 使用前先根据用量，将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，先用现配。 对于贴壁细胞或爬片，去掉培养基，用PBS洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞，加入新的PBS;如果需要观察全部细胞特性，保留未贴壁细胞，可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20ul工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。 对于悬浮细胞，可直接加入工作液或离心收集细胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20ul工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。 注意事项： 含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。 染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整，以期达到佳效果。 储存条件：4℃避光密封保存，有效期一年 |
细胞培养操作规程： 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法： 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Caprine Arthritis-encephalitis Virus(CAEV)山羊关节炎-脑脊髓炎病毒染料法荧光定量PCR试剂盒（同MVV） 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 牛源性成分PCR检测试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Semen raphani莱菔子探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Medulla junci灯心草LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Radix cynanchi atrati白薇LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 小麦源性成分PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Gasterophilus spp.马虻LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Mycoplasma hyosynoviae猪滑液支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rhizoma chuanxiong川芎LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Raccoonpox virus浣熊痘病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Raillietina cesticillus有轮瑞氏绦虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Fusarium virguliforme北美大豆猝死综合症病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 吖啶橙-EB双染色试剂盒冰冻切片组织钙钠交换体（NCX）蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD） 英文名称：Yeast Peptone Dextrose Agar 产品规格：250g GST融合蛋白因子10α（FACTOR Xa）切试剂盒 10次 细胞环氧化（CYCLOOXYGENASE）总活性比色法定量检测试剂盒 20次 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 20次 制检定培养基 英文名称：Nystatin Test Medium 产品规格：250g 细胞BTK激活性定量检测试剂盒（A/B/C） 20次 蛋白电泳尼罗红染色试剂盒 20次 食物污染ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次 木糖发酵管 英文名称： 产品规格：20支 细胞HISTONE H3蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 10/20次
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