操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。 8、结果分析 a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称：JC-1线粒体膜电位检测试剂盒 英文名称： 产品规格：20T|50T|100T 产品货号：BJ-01X6484 线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，488nm 激发时的大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为FL1和FL2双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，488nm 激发时大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞FL1均为阳性。凋亡细胞则大多为FL1 单阳性。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。 通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。试剂盒染料与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123 相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别； 储存条件：JC-1-20℃避光保存，避免反复冻融。孵育缓冲液2-8℃保存。 有效期：一年。 |
细胞培养操作规程： 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法： 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Trichomonas foetus胎儿滴虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒F型探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Pseudomonas syringae pv. tomato丁香假单胞杆番茄致病变种PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rotavirus C轮状病毒C群RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 鸡源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Flos buddlejae密蒙花LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Fructus schisandrae chinensis五味子PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Arthrobacter spp.节杆通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Radix sanguisorbae地榆LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 豹源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Equine Arteritis Virus(EAV)马动脉炎病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Porcine Parvovirus(PPV)猪细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 JC-1线粒体膜电位检测试剂盒鱼热休克蛋白70(HSP-70)免疫试剂盒*直销 人膜结合型IgM(mIgM)免疫试剂盒现货供应 XLT4琼脂 英文名称：XLT4 Agar 产品规格：250g 人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)免疫试剂盒*直销 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（2015药典） 英文名称：Violet Red Bile Glucose Agar 产品规格：250g 人蛋白3抗体(PR3Ab)免疫试剂盒进口、组装 木糖发酵管 英文名称： 产品规格：20支 人MAP双特异性1(DUSP-1)免疫试剂盒进口、分装 猪肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)免疫试剂盒进口、分装 牛脂酰辅A脱氢免疫试剂盒进口、组装 小鼠Ⅶ(FⅦ)免疫试剂盒*直销
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