设为主页 加入收藏 联系我们

公司公告

更多公告>>
产品展示
当前位置:首页 > 产品展示 > >>>>Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
点击放大
产品型号:
产品报价:
产品特点:
Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒公司正在出售的产品:0.312-20 ng/mL 人丙酮酸脱氢[硫辛酰胺]激同功1(PDK1)ELISA试剂盒 0.78-50 ng/mL 人脯氨酰4羟化亚基α2(4-PH alpha-2)ELISA试剂盒 1.56-100 ng/mL 人发动蛋白2(Dynamin-2)ELISA试剂盒 0.312-20 ng/mL 人线粒体天冬谷载体同工型
  Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒的详细资料:

产品参数:

中文名称

英文名称

产品规格

产品货号

Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒


50T|100T

BJ-01X6498

商品详细介绍:

产品背景:

细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。

在正常细胞中,磷脂酰丝(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。

AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS 高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得Annexin V 与PS的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。

检测原理:

在正常的活细胞中,磷脂酰丝(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。

Annexin-Ⅴ能与PS 高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝与凋亡早期细胞的胞膜结合。用标记了APC的AnnexinⅤ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤,坏死的细胞会结合Annexin V-APC。

Annexin V-APC 通常与细胞膜非渗透性核酸荧光染料联合使用以检测凋亡细胞。常用的染料是7-AAD。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的,核酸染料7-AAD 不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,7-AAD 能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。

7-AAD/Annexin V-APC试剂盒将Annexin Ⅴ与7-AAD匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与Annexin V-APC和7-AAD 结合显色,而7-AAD 则被排除在活细胞(APC阴性)和早期凋亡细胞(APC阳性)之外。在没有巨噬细胞的情况下,凋亡的后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体,从而使凋亡晚期的细胞也同时被APC和7-AAD 结合染色呈现双阳性。

储存条件:染色液2-8℃避光保存;结合液2-8℃保存;长期不用-20℃保存。

Annexin V-APC染色液避免反复冻融,冻融2次以上可能会失效。长期保存分装后-20℃保存。

有效期:一年。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
2.png

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Gymnosporangium clavipes榲桲锈病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Diarrheagenic Escherichia coli致泻性大肠杆(致泻性大肠埃希氏)通用探针法荧光定量PCR试剂盒,停 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Arillus longan龙眼肉探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Polyoma Virus(Py)多瘤病毒探针法荧光定量PCR试剂盒,停产 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Endoconcha sepiae海螵蛸PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Louping Ill Virus跳跃病病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Avian Adenovirus禽腺病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 1-2周

鱼源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒H亚群RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Beauveria bassiana球孢白僵LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Babesia motasi莫氏巴贝斯虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Human Immunodeficiency Virus 2(HIV-2)人免疫缺陷病毒II型A组前病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)免疫试剂盒特价直销

鸡丙二酸单酰辅A(malonyl CoA)免疫试剂盒进口、分装

小鼠FAM84A蛋白(FAM84A)免疫试剂盒进口、组装

大鼠透明质酸(HA)免疫试剂盒进口、组装

兔多肽YY(PYY)免疫试剂盒特价直销

大鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫试剂盒进口、分装

人血管生长素(ANG)免疫试剂盒现货供应

仓鼠白介素8(IL-8/CXCL8)免疫试剂盒特价直销

人亲环蛋白A(PPIA/CYPA)免疫试剂盒特价直销

M-Endo肉汤 英文名称:M-Endo Broth 产品规格:250g

人抗磷脂酰乙醇胺抗体(IgM)免疫试剂盒进口、组装

产品相关关键字: Annexin V-APC/7-AAD 细胞凋亡 检测试剂盒
 如果你对Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒感兴趣,想了解更详细的产品信息,填写下表直接与厂家联系:

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
 相关同类产品:
MTT检测试剂盒  MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒  增强型CCK-8试剂盒 
JC-10荧光探针  线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)  中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 
碘化丙啶PI  Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒  Caspase 1 活性检测试剂盒 
 
联系人:王经理
点击这里给我发消息
电话:
86-021-57763112
手机:
18917018169

智慧城市网

推荐收藏该企业网站