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细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)
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细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)公司正在出售的产品:0.156-10 ng/mL 人岩藻糖苷αL1(FUCα1)ELISA试剂盒 0.625-40 ng/mL 人Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Somatostatin receptor type 2 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit f
  细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)的详细资料:

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称:细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)

英文名称:JC-10 Apoptosis Detection Kit

产品规格:10T|20T|50T|100T

产品货号:BJ-01X6383

本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(△?)的破坏,被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。

本试剂盒采用JC-10 (Enhanced JC-1)一种阳离子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-100 可以选择性地进入线粒体,且由于膜电位的增加,其颜色会发生从绿色到橙色的可逆性改变。这种特性是由于JC-100 聚合物的可逆结构,在膜极化条件下,它的发射光由520nm(JC-100 单体发射光)转移到570nm (J-聚合体发射光)。当在490nm 处激发时,JC-100 发生从绿色到橙绿色的可逆改变。这两种颜色都可以被流式细胞仪上装好的一般滤光器检测到,因此绿色发射光可以通过荧光通道1(FL1)进行分析,橙绿色发射光可以通过荧光通道2(FL2)进行分析。它除了有潜力用于流式细胞术,也可以用于荧光成像分析。

注意事项

1. 微量试剂取用前请离心集液。

2. JC-10 避光保存及使用。

3. 细胞培养至汇合度80-90%,收集细胞量在1×106/Test。

4. 对PH 变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗涤,或延长观测时间。

5. 流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响,因诱导剂、细胞株类型,作用时间的不同而荧光强度比例都有不同,因此没有通用标准的补偿设门指南,因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。

6. 组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测,可选用我司细胞悬液制备试剂盒或线粒体提取试剂盒。

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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