操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。 8、结果分析 a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称：细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10) 英文名称：JC-10 Apoptosis Detection Kit 产品规格：10T|20T|50T|100T 产品货号：BJ-01X6383 本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△?）的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。 本试剂盒采用JC-10 (Enhanced JC-1)一种阳离子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-100 可以选择性地进入线粒体，且由于膜电位的增加，其颜色会发生从绿色到橙色的可逆性改变。这种特性是由于JC-100 聚合物的可逆结构，在膜极化条件下，它的发射光由520nm(JC-100 单体发射光)转移到570nm (J-聚合体发射光)。当在490nm 处激发时，JC-100 发生从绿色到橙绿色的可逆改变。这两种颜色都可以被流式细胞仪上装好的一般滤光器检测到，因此绿色发射光可以通过荧光通道1（FL1）进行分析，橙绿色发射光可以通过荧光通道2（FL2）进行分析。它除了有潜力用于流式细胞术，也可以用于荧光成像分析。 注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. JC-10 避光保存及使用。 3. 细胞培养至汇合度80-90%，收集细胞量在1×106/Test。 4. 对PH 变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗涤，或延长观测时间。 5. 流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。 6. 组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测，可选用我司细胞悬液制备试剂盒或线粒体提取试剂盒。 |
细胞培养操作规程： 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法： 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 鳕鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Dichelobacter nodosus节瘤拟杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rhizoma ligustici藁本PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Human T-cell Lymphoma Virus 1(HTLV-1)人类嗜T淋巴 病毒1型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Mycoplasma genitalium生殖支原体LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rhizoma pinelliae半夏LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Radix aconiti lateralis preparata附子LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Bacillus anthracis炭疽芽孢杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周 Culex spp.库蚊通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Didymella lycopersici Klebahn番茄亚隔孢壳茎腐病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Herba asari细辛LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Singapore Grouper Iridovirus(SGIV)新加坡石斑鱼虹彩病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)改良EC肉汤(mEC+n) 英文名称：Modified EC Broth 产品规格：250g 石蜡切片组织ER BETA 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次 大肠杆菌噬菌体MS2半固体培养基 英文名称：Coliphage MS2 Medium(Semisolid) 产品规格：250g 细胞糖原连续循环反应比色法定量检测试剂盒 20次 CYP2B1蛋白表达西方杂交分析试剂盒 5次 体液KSHV（KAPOSI SARCOMA-ASSOCIATED HERPESVIRUS）病毒定性检测试剂盒 20次 电泳分析试剂盒 细胞衰老特异性晚期脂褐素碱性品红 50次 载玻片细胞MYC蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 细胞CREB蛋白表达比色法定量检测试剂盒 10/50 次 裂解液VII：细裂解溶液 20/50次 |
设为主页
加入收藏
联系我们
