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阿尔玛蓝
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阿尔玛蓝公司正在出售的产品:31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 0.312-20 ng/mL ELISA Kit f
  阿尔玛蓝的详细资料:

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称:阿尔玛蓝

英文名称:Alamar Blue

产品规格:100T

产品货号:BJ-01X6453

阿尔玛蓝(Alamar Blue)是一种氧化还原指示剂,能根据代谢活性产生吸亮度变化和荧光信号。这是一种安全无毒的染料,可用于细胞活性和细胞增殖的定量分析以及细胞因子生物测定和体外细胞毒性研究,能有效测定动物、真菌和细菌细胞的天然代谢活性。Alamar Blue在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性,而在还原状态下,转变为呈粉红或红色荧光的还原产物,反映所研究的细胞或微生物对氧分子的消耗,因而常被用作氧化还原指示剂,以显示被观察细胞和细菌的代谢活动。这种测定是基于具有代谢活性的细胞将试剂转换成荧光和比色指示剂的能力。在细胞增殖过程中,细胞内NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高,处于还原环境。摄入细胞内的染料被这些代谢中间体及细胞色素类还原后释放到细胞外并溶于培养基中,使培养基从无荧光的靛青蓝变成有荧光的粉红色。受损和无活性细胞具有较低的天然代谢活性,因此对应的信号较低。可以用普通分光光度计或荧光光度计检测,其激发光波长在530-560 nm之间,发射光波长为590 nm。吸光度和荧光强度与活性细胞数成正比。

本品可广泛地用于细胞增殖代谢,药物的细胞毒作用的体外测定以及病原微生物的的快速检测与鉴定。 与台盼兰、TTC、MTT、MTS等分析法相比,Alamar Blue具有更多的优势。Alamar Blue采用单一试剂,可以连续、快速地检测细胞的增生状态。由于Alamar Blue对细胞无毒、无害,不影响细胞的抗体合成与分泌等活性,因此可以对同一批细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察,因此有操作简便和几乎不干扰细胞正常代谢的特点。

注意事项

1)需客户自行准备100%还原型Alamar Blue试剂。为得到还原型Alamar Blue,需配制Alamar Blue与细胞培养基的混合溶液,Alamar Blue与细胞培养基的比值为1:10,高压灭菌15min。(不能对浓缩的Alamar Blue高压灭菌,也不能用PBS配制溶液,因为100%还原型Alamar Blue在PBS中不稳定。)

2)为得到结果,建议实验前先摸索孵育时间和接种细胞数量。

3)合适密度的细胞可以增加检测灵敏度。对于96 孔板,我们建议每孔接种100 微升细胞,细胞浓度范围为:贴壁细胞在100-10,000/孔,悬浮细胞在2,000-50,000/孔,并以培养基为空白对照。对于384 孔板,细胞浓度和接种量均减半。

4)整个过程均应为无菌操作,因为微生物污染物同样可以还原检测试剂而影响实验结果。

5)注意接种细胞浓度和加入检测试剂后孵育时间。细胞浓度过高或孵育时间过长,会导致继发性还原反应,产生无色和荧光消失。

6)孵育时,须避光。

7)本产品可以使用荧光或分光光度计检测,但荧光的灵敏度高,实验误差小,推荐使用荧光检测。

储存条件:4℃,有效期一年

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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