操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。 8、结果分析 a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称：CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒 英文名称：CFSE Cell Proliferation and Tracking Kit 产品规格：2000T 产品货号：BJ-01X6412 CFSE细胞增殖与示踪检测试剂盒是基于一种新型荧光探针CFDA SE的用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。CFDA SE目前被广泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine掺入等其它细胞增殖检测方法。 基于CFDA SE荧光标记的细胞增殖检测和[3H]-thymidine掺入、BrdU标记获得的检测结果*一致，但同时可以提供更多的细胞增殖信息。使用CFDA SE检测可以提供整个细胞群中有多少比例的细胞分裂了1次、2次或更多次数，同时如果和其它荧光探针联用，可以获取不同分裂次数细胞的其它相关信息。 CFDA SE 的全称为Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式为C29H19NO11，分子量为557.47。CFDA SE可以通透细胞膜，进入细胞后可以被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶发性地(spontaneously)并不可逆地和细胞内蛋白的Lysine残基或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白。在加入荧光探针CFDA SE后大约24小时，即可充分标记细胞。被CFDA SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数个月。CFSE标记细胞的荧光非常均一，比以前使用的其它细胞示踪荧光探针例如PKH26的荧光更加均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均匀。 由于CFDA SE标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞(1/2的荧光强度)，分离两次的细胞(1/4的荧光强度)，分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。 CFDA SE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测，甚至还可以用于细菌增殖的检测。 |
细胞培养操作规程： 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法： 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Seman platycladi柏子仁PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Rhizoctonia solani立枯丝核染料法荧光定量PCR试剂盒 定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Measles Virus麻疹病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Nodus nelumbinis rhizomatis藕节PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Kyasanur Forest Disease Virus(KFDV)卡萨诺尔森林病病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Gymnosporangium globosum美洲山楂锈病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Viral Nervous Necrosis Virus(VNNV)病毒性神经坏死病病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Haemophilus parasuis副猪嗜血杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Fusarium moniliforme串珠镰刀LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Porcine Respiratory Coronavirus(PRCV)猪呼吸道探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Shovenose Sturgeon Iridovirus(SSIV)白鲟虹彩病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Haemophilus influenzae流感嗜血杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒血液一氧化氮（NO）活性荧光定量检测试剂盒 50次 细胞脂质过氧化物（MDA）活性TBARS比色法定量检测试剂盒 50次 组织血红素氧合-2（HEME OXYGENASE-2）活性荧光定量检测试剂盒 20次 体液乙酰酯活性化学发光法定量检测试剂盒 20次 植物羟赖（HYL）含量比色法定量检测试剂盒 20次 细胞糖原化学水解比色法定量检测试剂盒 20次 动力-硝酸盐培养基（A法） 英文名称：Power - nitrate medium 产品规格：250g DTM添加剂1 英文名称： 产品规格：1ml*5 蛋白巯基化（S-thiolation）高效液相色谱 （HPLC）分析试剂盒 20次 通用型HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病毒 20次 3%NaCl乳糖 英文名称： 产品规格：20支
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