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Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
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Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒公司正在出售的产品:0.156-10 ng/mL 人母体胚胎拉链激(MELK)ELISA试剂盒 62.5-4000 pg/mL 人C1q TNF相关蛋白-1(CTRP1/C1QTNF1)ELISA试剂盒 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Protein O-linked-mannose beta-1, 2-N-a
  Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒的详细资料:

中文名称:Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

英文名称:AlamaBlue Cell Viability Assay Kit

产品规格:500T

产品货号:BJ-01X6391

AlamaBlue 细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamaBlue 通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应,将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质,试卤灵(9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮),从而检测细胞的存活率。维持细胞生产需要还原性环境而抑制生长则表现为氧化型环境。细胞生长率相关的降低可表现为氧化还原指示剂从氧化型(非荧光素、紫色)转为还原型(荧光素、红色)。该荧光信号可以用530~560nm 的激发波激发,在590nm 处可以获发射波,检测570 和600nm 的的吸光度值,校正监测值,可以减去相应的570nm 和600nm 的背景吸光度值。检测所产生的荧光信号是与样品中的活细胞数成正比的。

AlamaBlue 细胞活性检测试剂盒的灵敏度相似于[3H]胸苷法检测细胞增殖法。根据不同类型的细胞,AlamaBlue 可以检测到至少40个细胞,同时保证很好的重现性和灵敏度。作为试卤灵(紫红、红色荧光)可以进一步被还原为水解化的试卤灵(无色、无荧光),当细胞数量增多,所有的刃天青(7-羟基-3-羰基-10-氧化-三氢吩恶嗪)被转换为试卤灵(9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮),试剂盒的信号反而会发生衰减。因此,对于您所用的试剂盒来说,针对不同的细胞类型,应该调整您的细胞数,做相应的优化,才能得到更好的结果。

操作说明

以下操作可用作通用指导建议。考虑不同细胞类型与培养条件的差异性,有必要根据实际情况优化您的操作步骤。

1. 96 孔细胞培养板每孔100μL 培养基饲养细胞,控制细胞数目在40~10000 个/贴壁细胞,2000~500000 个/悬浮细胞。设置空培养基做对照。

2. 加入10μL AlamaBlue 溶液至培养基中,37 度孵育:24 小时(比色法读数);5-6 小时(荧光读数)。

3. 检测570nm 和600nm 的吸光度,或者用荧光微孔板读数530nm 激发,590nm 发射波读数。

4. 如果采用比色法检测,选择OD570-OD600 检测,如果检测荧光信号,请在校正OD 值后,先设置标准曲线,选择合适您实验的细胞佳浓度。

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

 


产品相关关键字: 细胞增殖 细胞毒性 检测试剂盒 1 2-Benzanthracene
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