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ERRβ和ERRγ激动剂(DY131)
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ERRβ和ERRγ激动剂(DY131)公司正在出售的产品:Phospho-NFKB1(Ser907) 磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体 规格: 0.1mlAcetyl-Histone H3(K9) 乙酰化组蛋白H3抗体 规格: 0.1mlNucleostemin 核干细胞因子抗体(核苷酸结合蛋白3) 规格: 0.2mlFABP4 脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白 规格: 0.1mlPL
  ERRβ和ERRγ激动剂(DY131)的详细资料:

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数:

中文名称

英文名称

产品规格

产品货号

ERRβ和ERRγ激动剂(DY131)

DY131

1mL(10mM)|10mg|50mg

BJ-01X8570

商品详细介绍:

DY131(GSK9089)是ERRβ和ERRγ选择性激动剂,对ERRα,ERα和ERβ的活性极低。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

CAS号:95167-41-2

别名:GSK 9089

分子量:311.38

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

2.png 

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

CD66e / CEACAM5 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签活力和顶体反应三色(triple staining)染色试剂盒  50次

PRMT5 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签顶体形态花生凝集素荧光标记(PNA-FITC)染色试剂盒  20次

TrkA / NTRK1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签顶体形态豌豆凝集素荧光标记(PSA-FITC)染色试剂盒  20次

TrkA / NTRK1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签顶体形态刀A凝集素荧光标记(ConA-FITC)染色试剂盒  20次

MS4A1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签活力和顶体形态双重荧光染色试剂盒  20次

MS4A1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签膜功能低渗膨胀法(HOST)检测试剂盒  50次

CD3E 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签DNA吖啶橙(acridine orange)荧光检测试剂盒  50次

CD200 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签形态肖尔(shorr)染色试剂盒  20次

EphrinB2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签精液粒性白细胞染色试剂盒  50次

MFG-E8 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签精浆锌含量比色法定量检测试剂盒  20次

MFG-E8 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签精浆果糖含量比色法定量检测试剂盒  20次

ERRβ和ERRγ激动剂(DY131)HCLS1/LckBP1  造干细胞特异性蛋白抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的兔抗鸡IgM 规格: 0.1ml

TBL1Y  转导β样蛋白1抗体 规格: 0.2ml

UCHL5IP  泛素羧基末端水解5互相作用蛋白1抗体 规格: 0.2mlNIPAL2  NIPAL2蛋白抗体 规格: 0.2ml

Acetyl-Histone H3(K9)  乙酰化组蛋白H3抗体 规格: 0.1ml

STARD5  促黄体激素诱导蛋白5抗体 规格: 0.2ml

VIP Receptor 1/VAPC1  管活性肠肽受体-1抗体 0.1ml

Phospho-Pin1 (Ser16)  磷酸化肽基脯氨酞顺反异构Pinl抗体 规格: 0.1ml

GRK2/BARK1/ADRBK1  G蛋白偶合受体激2抗体 规格: 0.1mlE3 ubiquitin ligase/RNF218  E3泛素连接抗体 规格: 0.2ml

phospho-DOK1(Tyr362)  磷酸化D酪激衰减蛋白1抗体 规格: 0.1ml

phospho-HP1 alpha (Tyr24)  磷酸化异染色质蛋白1抗体(果蝇) 规格: 1ml

 


产品相关关键字: ERRβ和ERRγ 激动剂
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