培养操作步骤 ： 1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数： 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | 细胞凋亡检测试剂盒III(FITC) |
| 20T | BJ-01X6458 |
商品详细介绍： 保存条件：-20℃冰冻保存一年。 工作原理： 在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合链酶亲和素-荧光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化，在 520-530nm 发射荧光，呈黄绿色。凋亡的细包核呈黄绿色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。 试剂盒内容： 1．标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml 2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl 3．DIG-dUTP(×20)20μl 4．封闭液(Blocking Reagent)4ml 5．化抗抗体(× 100)20μl 6．SABC-FITC(× 100)20μl 7．Proteinase K(×200)50μl 8．抗体稀释液 4ml |
实验报告： 一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 
实验要点及说明： 1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点： 1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 Influenza Virus A甲型流感（）病毒H7亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Bovine Hepervirus 2 (BHV-2)牛疱疹病毒2型LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Herba eupatorii佩兰染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Bovine Respiartory Syncytial Virus(BRSV)牛呼吸道合胞体病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Semen strychni马钱子染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽传染性支气管炎病毒Conn型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Human Coronavirus(HCoV-HKU1)人HKU1 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Cortex eucommiae杜仲PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Herba polygoni avicularis萹蓄探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Nematodirus battus巴氏*线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Trypanosoma spp.锥虫通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Flos inulae旋覆花PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)石蜡切片组织CDK6蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 组织IGF-1R激活性定量检测试剂盒（A/B/C） 20次 固体培养基 英文名称：Solid medium 产品规格：250g 细胞氧化应激活性氧（ROS）光泽精化学发光法定量检测试剂盒 50次 细胞P21蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 10/20次 细胞基质金属蛋白（MMP-9）免疫捕获检测试剂盒 20次 蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒 100次 酵母甘肽过氧化物（GSH PX）活性动力比色法定量检测试剂盒 20次 酵母蛋白胨培养基 英文名称：Yeast Extract Peptone 产品规格：250g 察氏琼脂 英文名称：Czapek Dox Agar 产品规格：250g 萘啶酮酸2.25mg 英文名称： 产品规格：2.25mg/支*5
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