中文名称：Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 英文名称：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 产品规格：20次|50次 产品货号：BJ-01X6331 本试剂盒是用FITC标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷脂酰丝的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。一个包装的本试剂盒共可以检测20个细胞样品。 试剂盒组份： Annexin V-FITC——————100μl Annexin V-FITC结合液———12ml 碘化丙啶染色液——————220μl Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷脂结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。 Annexin V选择性结合磷脂酰丝(phosphatidylserine，简称PS)。磷脂酰丝主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷脂酰丝暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷脂酰丝结合后可以阻断磷脂酰丝的促凝血和促炎症反应活性。 用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷脂酰丝的外翻这一细胞凋亡的重要特征。 本试剂盒还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-FITC可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。 本试剂盒的流式检测效果参考图1和图2，荧光显微镜检测效果参考图3。 1.细胞用本试剂盒染色后流式细胞仪检测细胞凋亡的效果图。Jurkat细胞未经处理(A)或用10μM(Camptothecin)作用4小时(B)后，用本试剂盒染色，然后用流式细胞仪进行细胞的散射和荧光检测。从图中可以看出，经过凋亡诱导剂处理后的细胞，其Annexin V-FITC染色阳性并且PI染色阴性的细胞，即凋亡细胞，明显增加(B图的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞，即坏死细胞，也有所增加(B图的右上象限)。图中Annexin V-FITC染色阴性PI染色阳性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B图的左上象限)出现的细胞点是许可范围内的检测误差。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 2.细胞用本试剂盒染色后流式细胞仪检测效果验证图。Jurkat细胞用10μM(Camptothecin)作用4小时后，未经染色(A)、仅用本试剂盒中的PI进行染色(B)、仅用本试剂盒中的Annexin V-FITC进行染色(C)、用本试剂盒中的Annexin V-FITC和PI进行双染(D)。从图中可以看出，未经染色的是双阴性细胞(A)，仅PI染色后出现了预期的PI染色阳性的细胞，仅Annexin V-FITC染色出现了预期的Annexin V-FITC染色阳性的细胞，Annexin V-FITC和PI双染出现了预期的仅Annexin V-FITC染色阳性的凋亡细胞和双阳性的坏死细胞。出现的非预期的细胞点*在许可的误差范围内。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 储存条件：4℃避光，有效期6个月。 |
细胞培养操作规程： 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法： 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Haemophilus suis猪嗜血杆染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Semen persicae桃仁探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Rhizoma arisaematis天南星染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Yellow Fever Virus(YFV)黄热病病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Penicillium patulum展开青霉LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Influenza Virus A甲型流感（）病毒H2N2亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Fructus tribuli蒺藜染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Trichinella spp.旋毛虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Human Rhinovirus 1B 人鼻病毒1B LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Aeromonas punctata斑点气单胞探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Mycosphaerella linicola亚麻褐斑病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Fructus tsaoko草果PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒亮绿乳糖胆盐培养液（BGB） 英文名称：Brilliant Green Lactose Bile Broth 产品规格：250g 支原体肉汤培养基（不含琼脂和红） 英文名称：Mycoplasma Broth Medium 产品规格：250g IL-5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 100微克 纸片（30ug/片） 英文名称：Cephalosporin strip 产品规格：10片/瓶 YM11琼脂 英文名称：YM11 Agar 产品规格：250g IL-9（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 100微克 NF KAPPA B P50蛋白表达西方杂交分析试剂盒 5次 定量检测试剂盒 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基（2015药典） 英文名称：Getrimide Agar 产品规格：250g 细胞线粒体复合物II蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 10/20次 通用型LB细培养液 500毫升 操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。 8、结果分析 a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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