培养操作步骤 ： 1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数： 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | 细菌活性检测试剂盒-CCK8 |
| 250T|500T|1000T | BJ-01X6516 |
商品详细介绍： 细菌活性检测试剂盒 (CCK-8 法)是应用新型的水溶性四唑盐2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐快速高灵敏度检测细菌活性的比色检测产品。 本四唑盐在电子载体存在的情况下能够被细菌的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan，生成的Formazan 量与细菌的活性成正比。细菌活性越强，则颜色越深；细菌活性越弱，则颜色越浅。对于同样的细菌，颜色的深浅和细菌活性呈线性关系。 CCK-8溶液可以直接加入到细菌样品中，不需要预配各种成分，CCK-8溶液很稳定，对细菌没有毒性，可以长时间培养细菌。 储存条件：2-8℃避光保存。长期不用分装后-20℃避光保存。避免反复冻融。 注意： 1．CCK-8短期存放于2-8℃，长期存放请分装后-20℃避光保存。 2．避免反复冻融。 3．冻存后溶解时注意重新混匀。 有效期：一年。 |
实验报告： 一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 
实验要点及说明： 1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点： 1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 Infectious Salmon Anaemia Virus(ISAV)鲑鱼传染性贫血病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Simian T Lymphotropic Virus type 1(STL V-1) 猴T淋巴 趋向性病毒1型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒6型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Enterotoxigenic E.coli(ETEC)产肠性大肠杆（大肠埃希氏）探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rhizoma bletillae白及探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Human Rhinovirus 16 人鼻病毒16 探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Mycoplasma mycoidessubsp(capri)丝状支原体山羊亚种探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Salmonella heidelberg海德堡沙门氏探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Peach X-disease phytoplasma桃X病植原体PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 轮状病毒A群/诺如病毒GI/诺如病毒GII三重染料法荧光定量PCR试剂盒 定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Radix adenophorae南沙参探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Rhizoma sparganii三棱染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 细菌活性检测试剂盒-CCK8鸡血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫试剂盒进口、分装 小鼠白介素29(IL-29)免疫试剂盒进口、组装 大鼠血红蛋白(Hb)免疫试剂盒进口、组装 兔子β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)免疫试剂盒*直销 大鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)免疫试剂盒进口、分装 人乙酰受体抗体(AChRab)免疫试剂盒现货供应 大鼠DNA甲基转移1(DNMT1)免疫试剂盒现货供应 人肾上腺髓质素(ADM)免疫试剂盒*直销 350ml厌氧培养袋 英文名称： 产品规格：10个/包 人颗粒体蛋白(GRN)免疫试剂盒进口、组装 波尔顿选择性肉汤 英文名称：Bolton Broth 产品规格：250g |
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