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激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)
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激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)公司正在出售的产品:Neurexin 2 轴突蛋白2抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗狗IgG 规格: 0.1mlT2R38/TAS2R38 味觉受器蛋白T2R38抗体 规格: 0.2mlGoat Anti-human IgG/APC APC标记的
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中文名称:激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)

英文名称:BML-277

产品规格:1mL(10mM)|10mg|50mg

产品货号:BJ-01X7761

BML-277是一种选择性的检测点激酶2(Chk2)抑制剂,IC50为15nM。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

CAS号:516480-79-8

别名:Chk2 Inhibitor II;C 3742

纯度:97.14%

分子量:363.8

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)豆甾醇

英文名:Stigmasterol

分子式: C29H48O

分子量:412.69

CAS号:201-482-7

棉酚

英文名:Gossypol

分子式: C30H30O8

分子量:518.55

CAS号:303-45-7

栎瘿酸

英文名:Roburic acid

分子式: C30H48O2

分子量:440.70

CAS号:6812-81-3

灵芝酸A

英文名:Ganoderic acid A

分子式: C30H42O7

分子量:514.65  

CAS号:81907-62-2

灵芝酸B

英文名:Ganoderic acid B

分子式: C30H44O7

分子量:516.67  

CAS号:81907-61-1

芦荟宁

英文名:Aloenin

分子式: C19H22O1

分子量:410.37

CAS号:38412-46-3

一叶萩碱

英文名:Securinine

分子式: C13H15NO2

分子量:217.26  

CAS号:5610-40-2

支脱皂苷元

英文名:Gitogenin

分子式: C27H44O4

分子量:432.64

CAS号:511-96-6

左旋千金藤啶碱

英文名:L-Stepholidine

分子式: C19H21NO4

分子量:327.37

CAS号:16562-13-3

(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷

英文名:(-)-Syringaresnol-4-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside

分子式:C33H44O17  

分子量:712.69

CAS号:136997-64-3

(+)-松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷

英文名:(+)-pinoresinol-β-D-glucoside; (+)-pinoresinol-4-O-beta-D-glucopyranoside

分子式: C26H32O11  

分子量:520.5

CAS号:69251-96-3

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

 


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