细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：RAD51抑制剂(RI-1)

英文名称：RI-1

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7839

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

远志皂苷B

英文名：   Onjisaponin B

英文别名：   presenegenin-(3)-β-D-glucopyranosido-(28)-2-O-[β-D-galactopyranosyl (1→4)-β-D-xylopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl]-3-O-(α-L-rhamnopyranosyl)-4-O-(4

CAS登录号：   35906-36-6

分子式：   C80H120O39

藤黄酸

英文别名：   1,5-methano-1h,3h,11h-furo(3,4-g)pyrano(3,2-b)xanthene-1-crotonicacid,3a,4,5,;3,3,11-tetramethyl-13-(3-methyl-2-butenyl)-11-(4-7-tetrahydro-8-hydroxy-alph

CAS登录号：   2752-65-0

分子式：   C38H44O8

分子量：   628.75

雷酚内酯

英文名：   Triptophenolide

英文别名：   (3bR,9bS)-3b,4,5,9b,10,11-Hexahydro-6-hydroxy-9b-methyl-7-(1-methylethyl)phenanthro[1,2-c]furan-1(3H)-one

CAS登录号：   74285-86-2

分子式：   C20H24O3

伏波酯-12-十四烷酸酯-13-乙酸酯

CAS登录号：   16561-29-8

分子式：   C36H56O8

分子量：   616

分子结构：     

伏波酯-12-惕各酸酯-13-异丁酸酯

CAS登录号：   92214-54-5

分子式：   C29H40O8

分子量：   516

分子结构：     

Presapogenin CP4

CAS登录号：   75799-18-7

分子式：   C46H74O15

分子量：   866

分子结构：     

5补充中2

CAS登录号：   123350-57-2

分子式：   C41H66O12

分子量：   750

分子结构：     

5补充中3

CAS登录号：   60213-69-6

分子式：   C41H66O12

分子量：   750

分子结构：     

11-羟基柳杉酚

CAS登录号：   88664-08-8

分子式：   C20H28O3

分子量：   316

分子结构：     

3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇

CAS登录号：   1352001-09-2

分子式：   C32H52O3

分子量：   484

分子结构：     

苍耳亭

CAS登录号：   26791-73-1

分子式：   C15H18O3

分子量：   246

分子结构：     

RAD51抑制剂(RI-1)Hoechst33342染色试剂盒  100T  50T 人外周血AFP mRNA表达水平PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

Rhodamine 123染色试剂盒  100T  1 mg  Forskolin（腺苷酸环化激活剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

吖啶橙染色试剂盒  100T  500mL Denaturing Solution  Denaturing Solution  常温保存

Propidium Iodide染色试剂盒  100T  10mL Sephadex G50介质  

AO/PI双染试剂盒  100T  2 ug pIEXBac-c-EGFP-2 pIEXBac-c-EGFP-2 低温运输，-20℃保存

Colchicine  25ml  MiddleBrook7H11琼脂 Middle Brook 7H11 Agar 250g

Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒  50T|100T  1瓶 Jurkat77细胞株 Jurkat77 低温运输和保存

Annexin V-APC/PI细胞凋亡检测试剂盒  50T|100T  TB培养基 TB Medium 250g

Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒  50T|100T  1瓶 EBTr (NBL-4)细胞株 EBTr (NBL-4) 低温运输和保存

活细胞/膜损伤细胞双染试剂盒  500T|1000T  250mL Sodium Phosphate Buffer（钠缓冲液）,0.5M,pH7.0  Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.0  常温保存

Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO  200μl  20µL HRP标记的兔抗GST标签多抗 Anti GST-Tag Rabbit PAb,HRP -20℃保存