中文名称：拓扑异构酶抑制剂(Daun02)

英文名称：Daun02

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg

产品货号：BJ-01X7425

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Koi Herpesvirus(KHV)锦鲤疱疹病毒Sph基因LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周PCDHAC1  原钙粘蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Ostertagia podjapolskyi波氏奥斯特线虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Connexin-26  间隙连接蛋白26抗体 规格: 0.1ml

Kingella kingae金氏金氏探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CRMP1  二嘧啶相关蛋白1抗体 规格: 0.1mlATP1b2/Na+K+ATPase  钠钾ATP通道蛋白抗体 规格: 0.1ml

Radix euphorbiae pekinensis京大戟染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Glycodelin A/PP14  胎盘蛋白14抗体 规格: 0.1mlBRP44L  脑蛋白44样蛋白抗体 规格: 0.2ml

Influenza Virus B 乙型流感病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Cytokeratin 3+12  细胞角蛋白3+12抗体 规格: 0.2mlphospho-ASK1(Thr845)  磷酸化细胞凋亡信号调节激1抗体 规格: 0.1ml

Schistosoma nasale鼻血吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgG(3D3)/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的鼠抗人IgG单克隆抗体 规格: 0.1mlNRG1/HRG beta 1  细胞分化因子P45抗体 Heregulinβ 规格: 0.1ml

Herba leonuri益母草探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Rabbit anti-chicken IgG whole serum  兔抗鸡IgG抗清 规格: 1mlCCBE1  胶原蛋白和钙结合表皮生因子结构域1抗体 规格: 0.2ml

Madurella grisea灰马杜拉分枝LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周C5orf51  5号染色体开放阅读框51抗体 规格: 0.2mlphospho-CDK6 (Tyr24)  磷酸化周期素依赖性激6抗体 规格: 0.1ml

Rhinovirus鼻病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周UFD1L  泛素融合降解样蛋白1抗体 规格: 0.2mlCASC3/MLN51  瘤易候选基因3抗体 规格: 0.1ml

Myxosporidia spp.黏孢子虫属通用染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周TNFRSF13B  瘤坏死因子受体超家族成员13B抗体 规格: 0.2ml14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon)  14-3-3蛋白抗体 0.1ml

拓扑异构酶抑制剂(Daun02)p110 delta抑制剂（PIK-294）

HDAC抑制剂(BRD73954)

EHMT2抑制剂（BRD4770）

PI3Kγ抑制剂（AS-252424）

CDK杂环类抑制剂（NVP-LCQ195）

H-Ras·GTP与c-Raf-1RBD结合抑制剂(kobe2602)

PKD抑制剂（kb NB 142-70）

TGF-β I型受体家族ALK5抑制剂（A 77-01）

CA IX和CA XII抑制剂（U-104）

RGS抑制剂(CCG-63802)

K-Ras抑制剂(Oncrasin-1)

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)