培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数: 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | 多种激酶抑制剂(Flumatinib) | Flumatinib | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg | BJ-01X8252 |
商品详细介绍: Flumatinib是多种激酶抑制剂,对c-Abl,PDGFRβ和c-Kit的IC50为1.2nM,307.6nM和2662nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :895519-90-1 纯度:99.83% 分子量:562.59 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点: 1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 人 MBIP 基因全长ORF克隆人25羟基D2(25 HVD2)免疫试剂盒进口、分装 人 OSM 基因全长ORF克隆人20S蛋白体(20SP)免疫试剂盒现货供应 人 SCF 基因全长ORF克隆人2,3-二甘油酸(2,3-DPG)免疫试剂盒*直销 人 BAK1 基因全长ORF克隆人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)免疫试剂盒进口、组装 人 ARSA 基因全长ORF克隆人2 型次黄核苷酸脱氢(IMPDH)(IMPDH2)免疫试剂盒进口、分装 人 ANXA5 基因全长ORF克隆人Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)免疫试剂盒现货供应 人 Biglycan 基因全长ORF克隆人Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)免疫试剂盒*直销 人 ALK-3 / BMPRIA 基因全长ORF克隆人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)免疫试剂盒进口、组装 人 CD135 / FLK2 基因全长ORF克隆人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-I)免疫试剂盒进口、分装 人 FILIP1 / FLIP 基因全长ORF克隆人Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)免疫试剂盒现货供应 人 TPO R 基因全长ORF克隆人Ⅰ型胶原C端肽(ICTP)免疫试剂盒*直销 多种激酶抑制剂(Flumatinib)TLR4拮抗剂(Atractylenolide I) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Atractylenolide I200次 荧光染色细胞凋亡检测试剂盒 Fluorescent Staining Apoptosis Detection Kit 4℃避光保存 Meisoindigo 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg Meisoindigo25mL IEF Sample Buffer,2X,pH 3-10 IEF Sample Buffer,2X,pH 3-10 常温保存 TRPM8拮抗剂(RQ-00203078) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg RQ-00203078600次 即用型荧光定量PCR试剂盒 Instant Fluorescent qPCR Kit -20℃保存 Phorbol 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg Phorbol2 ug pLV-CMV pLV-CMV 低温运输,-20℃保存 Folinic acid calcium salt pentahydrate 1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg Folinic acid calcium salt pentahydrate固体培养基 Solid medium 250g Auristatin F 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg Auristatin F1瓶 NCI-H358细胞株 NCI-H358 低温运输和保存 Plinabulin 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PlinabulinCAYE培养基 CAYE Medium 250g mGlu1受体负变构调节剂(FITM) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg FITM100g 明胶 Gelatin 室温干燥保存 Hexaminolevulinate hydrochloride 1mL(10mM)|100mg|500mg Hexaminolevulinate hydrochloride250mL Blocking Reagent with Triton X-100 & Fetal Calf Serum Blocking Reagent with Triton X-100 & Fetal Calf Serum 常温保存 cysteinyl leukotriene受体1拮抗剂(Pranlukast hemihydrate) 1mL(10mM)|50mg|100mg Pranlukast hemihydrate0.1mL 微量RNA助沉剂 RNADOWN -20℃保存 TAS-102 5mg|10mg|50mg|100mg TAS-1022 ug pGL4.12[luc2CP] pGL4.12[luc2CP] 低温运输,-20℃保存
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