培养操作步骤 ： 1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数： 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | 淋巴细胞分离液1.084 | Lymphocyte separation medium1.084 | 100ml | BJ-01X6546 |
商品详细介绍： 淋巴细胞分离液（Lymphocyte Separation Medium 1.084，简称LSM-1.084）是一种无菌的即用型分离液，基于B?yum的Ficoll-甲泛影钠溶液做过一些改良，使得操作简单快速且分离效率更高。本品是无菌的聚蔗糖Ficoll/钠混合溶液，密度为1.084 g/ml，内毒素含量很低（＜0.12 EU/ml），是在严格控制的环境下加工的，条件符合ISO13485:2003标准和GMP认证。相对于密度为1.077 g/ml的人淋巴细胞分离液，本品适用于分离更高密度的人单个核细胞，包括外周血，脐带血以及骨髓瘤来源的组织样本。还适用于分离大小鼠血细胞，正因为啮齿动物的淋巴细胞密度稍高于人淋巴细胞。 工作原理 去纤维蛋白或抗凝人血以1：1的比例用无菌生理盐水或稀释，小心的添加在分离液上层（不要混杂在一起），之后离心30-40min。离心过程中，差速迁移使其终形成几个不同的细胞分层： ①聚集在管底的颗粒主要是Ficoll 聚集的红细胞以及沉淀物； ②紧挨着上面一层的颗粒主要是粒细胞，其处于LSM-1.084溶液的渗透压临界，具有足够高的密度迁移穿过LSM-1.084溶液层。 ③单个核细胞分布在血浆和LSM-1.084分离液的中间层，还包括一些沉降系数低（密度低）的颗粒，如血小板。 淋巴细胞，单核细胞和血小板不具有足够高的密度穿透LSM-1.084分离液层，因此这些细胞在血浆和LSM-1.084分离液层聚集形成一个中间分层。吸取中间层，用短暂洗涤，以除去血小板，细胞分离介质和血浆，就可以单个核细胞。通常情况下，分离所得的细胞中95±5%为单个核细胞，细胞存活率＞90%，回收率为60±20%。 储存条件：4～8℃，避光 |
实验报告： 一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 
实验要点及说明： 1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点： 1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 Fasciola hepatica肝片吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Cortex moutan牡丹皮染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Cryptosporidium spp.隐孢子虫通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Bacillus atrophaeus芽孢杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Actinomyces gerencseriae戈氏放线LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Mycobacterium bovis BCG牛分枝杆卡介苗探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Mycoplasma genitalium生殖支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Human Polyomavirus 6 （HPyV6）人多瘤病毒6 染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Ancylostoma duodenale十二指肠钩口线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Vibrio alginolyticus溶藻弧LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rhizoma cynanchi stauntonii白前染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Porcine Torque Teno Virus（PTTV）猪细环病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周 淋巴细胞分离液1.084芦丁 ： 153-18-4 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询 人B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫试剂盒进口、组装 小鼠整合素α-IIb(Itga2b/CD41)免疫试剂盒进口、分装 牛胱天蛋白9(Casp-9)免疫试剂盒*直销 小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)免疫试剂盒现货供应 猴组胺(HIS)免疫试剂盒进口、分装 小鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)免疫试剂盒*直销 大鼠肾素(Renin)免疫试剂盒*直销 山羊生长激素(GH)免疫试剂盒*直销 大鼠肥大细胞类胰凝乳蛋白免疫试剂盒进口、组装 人锌α2糖蛋白(AZGP1)免疫试剂盒进口、分装
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