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淋巴细胞分离液1.084
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淋巴细胞分离液1.084公司正在出售的产品:0.312-20 nmol/mL ELISA Kit for Human Lanosterol synthase 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Beta-1, 4-galactosyltransferase 5 62.5-4000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement facto
  淋巴细胞分离液1.084的详细资料:

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数:

中文名称

英文名称

产品规格

产品货号

淋巴细胞分离液1.084

Lymphocyte separation medium1.084

100ml

BJ-01X6546

商品详细介绍:

淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium 1.084,简称LSM-1.084)是一种无菌的即用型分离液,基于B?yum的Ficoll-甲泛影钠溶液做过一些改良,使得操作简单快速且分离效率更高。本品是无菌的聚蔗糖Ficoll/钠混合溶液,密度为1.084 g/ml,内毒素含量很低(<0.12 EU/ml),是在严格控制的环境下加工生产的,生产条件符合ISO13485:2003标准和GMP认证。相对于密度为1.077 g/ml的人淋巴细胞分离液,本品适用于分离更高密度的人单个核细胞,包括外周血,脐带血以及骨髓瘤来源的组织样本。还适用于分离大小鼠血细胞,正因为啮齿动物的淋巴细胞密度稍高于人淋巴细胞。

工作原理

去纤维蛋白或抗凝人血以1:1的比例用无菌生理盐水或稀释,小心的添加在分离液上层(不要混杂在一起),之后离心30-40min。离心过程中,差速迁移使其终形成几个不同的细胞分层:

①聚集在管底的颗粒主要是Ficoll 聚集的红细胞以及沉淀物;

②紧挨着上面一层的颗粒主要是粒细胞,其处于LSM-1.084溶液的渗透压临界,具有足够高的密度迁移穿过LSM-1.084溶液层。

③单个核细胞分布在血浆和LSM-1.084分离液的中间层,还包括一些沉降系数低(密度低)的颗粒,如血小板。

淋巴细胞,单核细胞和血小板不具有足够高的密度穿透LSM-1.084分离液层,因此这些细胞在血浆和LSM-1.084分离液层聚集形成一个中间分层。吸取中间层,用短暂洗涤,以除去血小板,细胞分离介质和血浆,就可以单个核细胞。通常情况下,分离所得的细胞中95±5%为单个核细胞,细胞存活率>90%,回收率为60±20%。

储存条件:4~8℃,避光

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

2.png 

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Fasciola hepatica肝片吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Cortex moutan牡丹皮染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Cryptosporidium spp.隐孢子虫通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Bacillus atrophaeus芽孢杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Actinomyces gerencseriae戈氏放线LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Mycobacterium bovis BCG牛分枝杆卡介苗探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Mycoplasma genitalium生殖支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Human Polyomavirus 6 (HPyV6)人多瘤病毒6 染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Ancylostoma duodenale十二指肠钩口线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Vibrio alginolyticus溶藻弧LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Rhizoma cynanchi stauntonii白前染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Porcine Torque Teno Virus(PTTV)猪细环病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 20度 一年 2-4周

淋巴细胞分离液1.084芦丁 CAS号: 153-18-4 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

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