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Percoll
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Percoll公司正在出售的产品:0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Collagenase 3 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Beta-defensin 1 0.625-40 ng/mL 口蹄疫病毒O亞型(FMDV-O)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 0.312-20 ng/mL 人核因子κB(NF-κB)ELISA
  Percoll的详细资料:

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称:Percoll

英文名称:

产品规格:100ml

产品货号:BJ-01X6547

Percoll是一种适用性广且操作灵活简单的低密度梯度分离液,可用来分离细胞,亚细胞颗粒,细菌,病毒,甚至实现受损细胞及其碎片与完整活细胞的分离。Percoll主要由表面包被单层乙烯烷酮(PVP)的硅胶颗粒组成,直径15-30 nm,游离PVP的含量仅占1-2%。由于颗粒大小的异质化,离心过程以不同的速率沉淀,自发产生一个匀质化且等渗的梯度,密度在1.0-1.3 g/ml之间。大部分沉淀系数>60S的生物颗粒都可以用Percoll实现分离。

本品是无菌的溶液,呈无色至浅黄色,具有以下几大特点,

1)Percoll形成的梯度密度范围在1.0-1.3 g/ml之间,整个梯度体系都是等渗的;

2)无细胞毒性,化学惰性,不会粘附到细胞膜上;

3)可调节至生理离子强度和pH;

4)温和条件分离细胞,亚细胞颗粒和较大病毒(低至~70S),可保持其活力和形态完整性;

5)只需角转头中速离心即可实现预成梯度或者自发形成梯度分离;

6)Percoll粘度低(10±5 cP at 20℃),能够快速形成梯度和颗粒分离;采用预制梯度分离低速离心力(200-1000×g)仅需数分至数十分钟即可达到满意的分离结果;

7)Percoll稳定性高,未开封的产品室温保存5年有效;开封的产品室温无菌保存至少2年有效;

8)Percoll(未稀释)可重新高压灭菌,120℃,30min;

储存条件:4-30℃,有效期5年

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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