操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:STAT3抑制剂 英文名称:Homoharringtonine 产品规格:1mL(10mM)|10mg|50mg 产品货号:BJ-01X7395 Homoharringtonine是一种细胞毒性生物碱,作用于抗Gefitinib的肺癌细胞,诱导细胞凋亡,且通过IL-6/JAK1/STAT3信号通路来抑制STAT3。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :26833-87-4 别名:Omacetaxine mepesuccinate;HHT 纯度:98.71% 分子量:545.62 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Herba polygoni avicularis萹蓄LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Nuclear Matrix Protein p84/NMP84 核基质p84蛋白抗体 规格: 0.2mlDlx1 同源转录因子DLX1抗体 规格: 0.2ml Sendai Virus(SV)仙台病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周GilZ/TilZ 糖皮质激素诱导亮拉链蛋白抗体 规格: 0.2mlPhospho-EGFR(Ser991) 磷酸化表皮生因子受体抗体 规格: 0.1ml Clostridium haemolyticum溶血梭状芽孢杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Actin α/alpha-SMA 肌动蛋白α(α-SMA)抗体 0.1ml Impatiens Necrotic Spot Virus(INSV)凤仙花坏死斑点病毒RT-PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ANKS1B/AIDA1 β淀粉样蛋白胞内结构域相关蛋白1抗体 规格: 0.2ml Herba cirsii japonici大蓟PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Phospho-NFKB1(Ser338) 磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体 规格: 0.1ml Rotavirus B轮状病毒B群RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周TPD52/Prostate and colon associated protein 前列和结肠相关蛋白 规格: 0.2ml Influenza Virus A甲型流感()病毒H3N2亚型 探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Acetyl-Histone H2A(K5) 乙酰化组蛋白H2A抗体 规格: 0.1ml Radix gentianae macrophyllae秦艽染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Claudin 14 紧密连接蛋白14抗体 规格: 0.2ml Porcine Circovirus 2 (PCV-2)猪圆环病毒2型LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CKLFSF2/CMTM2 趋化素样因子超家族成员2抗体 0.2ml Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA)改良安卡拉痘苗病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周FES 原基因酪蛋白激FES抗体 规格: 0.2ml STAT3抑制剂USP7小分子抑制剂(USP7-IN-1) DYRK抑制剂(ID-8) Bcr-Abl野生型和T315I突变型抑制剂(GZD824) CK2抑制剂(Ellagic acid) neurokininNK1受体抑制剂(Rolapitant) HER2/ErbB2抑制剂(CP-724714) RHA与EWS-FLI1结合抑制剂(YK-4-279) Pim抑制剂(TCS-PIM-1-4a) 芳香酶(aromatase)抑制剂(Exemestane) Aurora A/Aurora B和Aurora C抑制剂(PHA-680632) SIRT1抑制剂(Inauhzin)
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