操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：CDK8andWnt抑制剂(Wogonin)

英文名称：Wogonin

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7859

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

花椒毒素

英文名：   8-Methoxypsoralen

英文别名：   xanthotoxin；methoxsalen；ammoidin

CAS登录号：   298-81-7

分子式：   C12H8O4

常春藤皂苷元

英文名：   Hederagenin

英文别名：   3beta,4alpha)-3,23-Dihydroxyolean-12-en-28-oic acid

CAS登录号：   465-99-6

分子式：   C30H48O4

鹰嘴豆芽素A

英文名：   Biochanin A

英文别名：   5,7-Dihydroxy-4'-methoxyisoflavone；Genistein 4′-methyl ether；5,7-Dihydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one

CAS登录号：   491-80-5

分子式：   C16H12O5

圣草酚

英文名：   Eriodictyol

英文别名：   Eriodictiol;(S)-3’,4’,5,7-Tetrahydroxyflavanone; (S)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-4- benzopyrone

CAS登录号：   552-58-9

分子式：   C15H12O6

补骨脂酚

英文名：   Bakuchiol

英文别名：   4-[(1E,3S)-3-ethenyl-3,7-dimethyl-1,6-octadienyl]-Phenol

CAS登录号：   10309-37-2

分子式：   C18H24O

川陈皮素

英文名：   Nobiletin

英文别名：   2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5,6,7,8-tetramethoxychromen-4-one

CAS登录号：   478-01-3

分子式：   C21H22O8

钩吻素子

英文名：   Koumine

CAS登录号：   1358-76-5

分子式：   C20H22N2O

分子量：   306.40

钩吻碱

英文名：   Gelsemine

英文别名：   Gelsemine free base

CAS登录号：   509-15-9

分子式：   C20H22N2O2

獐牙菜苷

英文名：   Sweroside

英文别名：   (4aS,5R,6S)-5-Ethenyl-6-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,4a,5,6-tetrahydro-3H-pyrano[3,4-c]pyran-1-one

CAS登录号：   14215-86-2

分子式：   C16H22O9

小白菊内酯

英文别名：   2,3,6,7,7a,8,10a,10b-Octahydro-1a,5-dimethyl-8-methyleneoxireno(9,10)cyclodeca(1,2-b)furan-9(1aH)-one;Parthenolide;4Xi-germacra-1(10),11(13)-dien-12-oic acid, 4,5-epoxy-6.alpha.-hydroxy-, gamma-lactone;Oxireno(9,10)cyclodeca(1,2-B)furan-9(1ah)-one, 2,3,6,7,7A,8,10A,10B-octahydro-1A,5-dimethyl-8-methylene-;Parthenlide

CAS登录号：   20554-84-1

分子式：   C15H20O3

分子量：   248.32

根皮素

英文名：   Phloretin

英文别名：   3-(4-hydroxyphenyl)-1-(2,4,6-trihydroxyphenyl)propan-1-one

CAS登录号：   60-82-2

分子式：   C15H14O5

CDK8andWnt抑制剂(Wogonin)迪夫快速染色液  2×100ml|2×500ml|3×100ml|3×250ml|3×500ml  Diff-Quik Stain Solution2 ug pMETα A pMETα A 低温运输，-20℃保存

Rakoff染色液  100ml|500ml  胰蛋白胨 Tryptone 250g

网织红细胞染色液  50ml|100ml  1瓶 SHZ-88细胞株 SHZ-88 低温运输和保存

煌焦油蓝染色液  100ml  TMP琼脂培养基 TMP Agar 250g

支原体染色液  10ml|50ml  Dienes Solution5g 腐胺 1,4-Diaminobutane         室温干燥避光保存

Dacie氏液  100ml  50T 大米BT63基因PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

红细胞稀释液(计数液)  100ml  250次 绿如蓝蛋白染液 One-Step PAGEblue 常温保存

血小板稀释液(计数液)  100ml  2 ug pBC-SK pBC-SK 低温运输，-20℃保存

嗜酸性粒细胞稀释液(计数液)  100ml  50次 革氏阳性细菌质粒DNAout Gram+ Bacterial Plasmid DNAOUT 常温保存(RNase A溶液4℃保存)

嗜酸性粒细胞染色液  2×100ml  2 ug pET-32a(+) pET-32a(+) 低温运输，-20℃保存

尿沉渣染色液(Sternheimer法)  50ml|100ml  2015版中国药典培养基