细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：type II CDK2抑制剂(K03861)

英文名称：K03861

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

产品货号：BJ-01X8187

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

人 FLRT2 基因全长ORF克隆人丁型肝炎病毒抗体(HDV antibody)免疫试剂盒*直销

人 ATIC 基因全长ORF克隆人丁型肝炎病毒(HDV)抗原免疫试剂盒进口、组装

人 AKR1B1 基因全长ORF克隆人丁型肝炎IgM(HDV IgM)免疫试剂盒进口、分装

人 ADRA2B 基因全长ORF克隆人丁型肝炎IgG(HDV IgG)免疫试剂盒现货供应

人 CCL3 基因全长ORF克隆人丁酰酯(BCHE)免疫试剂盒*直销

人 CDC25A 基因全长ORF克隆人(AZT)免疫试剂盒进口、组装

人 IGSF3 转录变体2 基因全长ORF克隆人调宁蛋白-1(CNN1)免疫试剂盒进口、分装

人 AKAP7 基因全长ORF克隆人凋亡抑制因子3(BIRC4/API3)免疫试剂盒现货供应

人 TXNDC17 基因全长ORF克隆人凋亡相关蛋白激(DAPK)免疫试剂盒*直销

人 ADSL 基因全长ORF克隆人凋亡相关半胱肽4(Casp4)免疫试剂盒进口、组装

人 ALDH3A2 基因全长ORF克隆人凋亡蛋白激活因子1(APAF1)免疫试剂盒进口、分装

type II CDK2抑制剂(K03861)DAB显色试剂盒黄色(IHC)  1Kit  DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC (Yellow Color)50T 水痘带状疱疹病毒PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

BCIP/NBT显色试剂盒蓝紫色(IHC)  1kit  BCIP/NBT Alkaline Phosphatase (AP) Substrate Kit For IHC1 mg SB203580（p38 MAPK抑制剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

DAB显色试剂盒紫蓝色(WB)  1KIT  DAB Peroxidase Substrate Kit for Western Blot (Purple-Blue Color)250mL Gelatin Veronal Buffer (GVB)   Gelatin Veronal Buffer (GVB)   常温保存

DAB显色试剂盒棕黄色(WB)  1KIT  DAB Peroxidase Substrate Kit for Western Blot (Brown-Yellow Color)10uL AP标记的抗辛抗体 Anti DIG Ab,AP 4℃保存

抗GST标签琼脂糖介质  100μl|500μl  Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin2 ug pJRD215 pJRD215 低温运输，-20℃保存

抗His标签抗体琼脂糖介质  100μl|500μl  Anti-His Mouse Monoclonal Antibody Agarose 醇类中和剂管  9ml*20

抗c-Myc标签抗体琼脂糖介质  100μl  Anti-Myc Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin1瓶 M1细胞株 M1 低温运输和保存

YT?免疫组化染色二抗稀释液  100ml  YT? Secondary Antibody Dilution Buffer for ImmunohistochemistryMPC琼脂培养基 MPC Agar Medium 250g

YT?免疫荧光染色二抗稀释液  100ml  YT? Secondary Antibody Dilution Buffer for Immunofluorescence5mg 碱性 ( 大肠杆菌 ) Phosphatase Alkaline（E.coli） -20℃保存

YT?免疫染色一抗稀释液  100ml  YT? Primary Antibody Dilution Buffer for Immunol Staining100mL TB Solution-III   TB Solution-III   常温保存

YT?免疫染色封闭液  100ml  YT? Blocking Buffer for Immunol Staining5次 包涵体中量纯化试剂盒 Inclusion Body Midiprep Kit 常温保存（和核酸清除剂需要-20℃保存，包涵体溶解液室温保存）