操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：MEK1/2抑制剂（AZD8330）

英文名称：AZD8330

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X8006

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人 GMPPB 基因全长ORF克隆兔信号肽,CUB域,EGF样1(SCUBE1)免疫试剂盒*直销

人 ARG2 基因全长ORF克隆兔心肌特异性肌钙蛋白T(c)免疫试剂盒进口、组装

人 KLHDC8A 基因全长ORF克隆兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫试剂盒进口、分装

人 PLEK 基因全长ORF克隆兔纤溶抑制因子(TAFI)免疫试剂盒现货供应

人 PARD6A 基因全长ORF克隆兔纤溶抗纤溶复合物(PAP)免疫试剂盒*直销

人 HOMER2 基因全长ORF克隆兔细胞色素b-245重链(CYBB)免疫试剂盒进口、组装

人 IL1RL2 基因全长ORF克隆兔维甲酸受体应答蛋白2(RARRES2)免疫试剂盒进口、分装

人 GLOD4 基因全长ORF克隆兔糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)免疫试剂盒现货供应

人 YIF1B 基因全长ORF克隆兔肾素(Renin)免疫试剂盒*直销

人 DLX3 基因全长ORF克隆兔肾上腺素(EPI)免疫试剂盒进口、组装

人 FHL3 基因全长ORF克隆兔神经型乙酰受体亚基α7(CHRNA7)免疫试剂盒进口、分装

MEK1/2抑制剂（AZD8330）Cdc25双重特异性磷酸酶抑制剂（NSC 663284）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  NSC 6632841个 0.5mLDNA超滤离心管(300-500KD)  

ASK1抑制剂（ASK1-IN-1）  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  ASK1-IN-110mL 溶液,25mg/mL Chloramphenicol Solution -20℃避光保存

GlyT1抑制剂（LY2365109 hydrochloride）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  LY2365109 hydrochloride2 ug pOTB7 TOMM70A pOTB7 TOMM70A 低温运输，-20℃保存

ITPKA抑制剂(BAMB-4)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg  BAMB-4乳糖-双岐杆菌鉴定  20支

RAD51抑制剂(RAD51 Inhibitor B02)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  RAD51 Inhibitor B022 ug pBlueScriptR TTC21B pBlueScriptR TTC21B 低温运输，-20℃保存

TNKS1/2抑制剂(AZ6102)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  AZ6102弧菌检验检验培养基  

STK16激酶抑制剂（STK16-IN-1）  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  STK16-IN-110g 二肽 Glycylglycine 室温干燥保存

IDO抑制剂(IDO-IN-5)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg  IDO-IN-550T 甲型流感病毒PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

MMP9抑制剂(Isoginkgetin)  1mL(10mM)|5mg|10mg  Isoginkgetin250mL 消化液(含EDTA) Trypsin Solution -20℃保存

farnesyl transferase抑制剂（BMS-214662）  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  BMS-21466250T 肠道病毒通用型/EV71/柯萨奇病毒A16型3联PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

CDK9抑制剂（CDK9-IN-6）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  CDK9-IN-6100mL DNTris HCl，1M，pH8.0