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双重PI3K/mTOR抑制剂(GNE-477)
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双重PI3K/mTOR抑制剂(GNE-477)公司正在出售的产品:IGFBP2 胰岛素样生因子结合蛋白2抗体 规格: 0.1mlPhospho-IRAK1 (Thr209) 磷酸化白介素-1受体相关激1抗体 规格: 0.1mlCTNNBIP1 β链接素相互作用蛋白1抗体 规格: 0.1mlACVRL1/ALK1 激活素受体样激1抗体 规格: 0.2mlEEF2 真核翻译延因子2抗体 规格
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双重PI3K/mTOR抑制剂(GNE-477)

GNE-477

1mL(10mM)|1mg|5mg

BJ-01X8338

商品详细介绍:

GNE-477是一个高效双重PI3K/mTOR抑制剂,对PI3K的IC50值为4nM,对mTOR的Kiapp值为21nM。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

CAS号:1032754-81-6

纯度:98.45%

分子量:504.63

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
2.png

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

小鼠 ANKH 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤特异生长因子(TSGF)免疫试剂盒进口、组装

小鼠 ST6GALNAC2 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子诱导蛋白6(TSG-6)免疫试剂盒进口、分装

小鼠 VCL 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体4(TRAIL-R4)免疫试剂盒现货供应

小鼠 FZD5 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体3(TRAIL-R3)免疫试剂盒*直销

小鼠 CIRH1A 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(TRAIL-R1)免疫试剂盒进口、组装

小鼠 SELPLG 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)免疫试剂盒进口、分装

小鼠 CTSS 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员11A(TNFRSF11A/RANK)免疫试剂盒现货供应

小鼠 CAR10 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)免疫试剂盒*直销

小鼠 CAR8 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)免疫试剂盒进口、组装

小鼠 BGN 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子γ(TNF-γ)免疫试剂盒进口、分装

小鼠 APTX 基因全长ORF克隆大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)免疫试剂盒现货供应

双重PI3K/mTOR抑制剂(GNE-477)GC琼脂 GC Agar Base 250g

1瓶 NCI-H2227细胞株 NCI-H2227 低温运输和保存

ModifiedSclohtens'Broth(MSB) Modified Sclohtens' Broth 250g

25g L- 天 L-Asparagine 室温保存

1000mL Tris-Glycine-Native Running Buffer,10X Tris-Glycine-Native Running Buffer,10X 常温保存

10g 考马斯亮蓝R-250 Coomassie Blue R-250 常温保存

即用型无菌袋装液体培养基  

50次 柱式动物DNAout Column Animal DNAOUT 常温

2 ug p426 GAL p426 GAL 低温运输,-20℃保存

厌氧肉肝汤培养基 Anaerobic Beef Liver Broth 250g

1g 亚精胺三盐酸盐 Spermidine Trihydrochloride -20℃保存

 


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