操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：EGFR抑制剂(Pelitinib)

英文名称：Pelitinib

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7860

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

原苏木素B

英文名：   Protosappanin B

CAS登录号：   102036-29-3

分子式：   C16H16O6

分子量：   304.09

蔓荆子黄素

英文名：   Vitexicarpin

英文别名：   Casticin

CAS登录号：   479-91-4

分子式：   C19H18O8

牡荆素

英文名：   Vitexin

英文别名：   Apigenin 8-C-glucoside; Vitexina; 4H-1-Benzopyran-4-one, 8-β-D-glucopyranosyl-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-

CAS登录号：   3681-93-4

分子式：   C21H20O10

马钱苷酸

英文名：   Loganic acid

英文别名：   Loganate

CAS登录号：   22255-40-9

分子式：   C16H24O10

乙酰哈巴苷

英文名：   8-O-Acetylharpagide

英文别名：   Acetylharpagide; (1S,4aS,5R,7S,7aS)-1-(hexopyranosyloxy)-4a,5-dihydroxy-7-methyl-1,4a,5,6,7,7a-hexahydrocyclopenta[c]pyran-7-yl acetate

CAS登录号：   6926-14-3

分子式：   C17H26O11

EGFR抑制剂(Pelitinib)尿沉渣染色液(Sternheimer-Malbin法)  50ml|100ml  1瓶 A2780/Taxol细胞株 A2780/Taxol 低温运输和保存

精子稀释液(含Trypan Blue,计数液)  100ml  1个 15mLDNA超滤离心管(90-150KD)  

白细胞稀释液(计数液)  100ml  500次 总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS法） Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

精子稀释液(计数液)  100ml  100mL Methylene Blue Stain,100x Methylene Blue Stain,100x 常温保存

精子活体染色液(伊红法)  10ml  100次 真菌种属鉴定 PCR Mix 3（LSU） Fungal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

精子形态学快速染色液(Diff-Quik法)  3×20ml|3×100ml  2 ug pAN7-1 pAN7-1 低温运输，-20℃保存

精子形态学染色液(巴氏法)  4×20ml|4×100ml|4×500ml  叠氮钠-七叶苷琼脂  250g

微丝染色液(R250法)  5×20ml|5×50ml  1瓶 RYTF细胞株 RYTF 低温运输和保存

碱性蛋白染色液(细胞专用)  2×50ml  萘啶酮酸2.25mg  2.25mg/支*5

酸性蛋白染色液(细胞专用)  2×50ml  10g 脱氧胆酸 Deoxycholic Acid  室温干燥保存

碱性固绿染色液  2×50ml  50T 副流感病毒Ⅲ型PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存