细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：IGF-IR/InsR和ALK抑制剂（GSK1838705A）

英文名称：GSK1838705A

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X8275

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

人 PROK1 / EG-VEGF 基因全长ORF克隆牛脂酰辅A合成免疫试剂盒进口、分装

人 P53 转录变体1 基因全长ORF克隆牛脂联素(ADP)免疫试剂盒现货供应

人 S100B 基因全长ORF克隆牛脂多糖结合蛋白(LBP)免疫试剂盒*直销

人 S100A2 基因全长ORF克隆牛脂蛋白脂(LPL)免疫试剂盒进口、组装

人 S100A1 基因全长ORF克隆牛载脂蛋白B100(Apo-B100)免疫试剂盒进口、分装

人 CNTN4 转录变体1 基因全长ORF克隆牛孕激素/孕酮(PROG)免疫试剂盒现货供应

人 IL1R8 基因全长ORF克隆牛诱导型一氧化氮合成(iNOS)免疫试剂盒*直销

人 IL18RAP / IL1R7 基因全长ORF克隆牛游离纤溶抑制因子/凝血激活的纤溶抑制物(TAFI)免疫试剂盒进口、组装

人 DR6 / TNFRSF21 基因全长ORF克隆牛印度刺猬因子(IHH)免疫试剂盒进口、分装

人 CNTN3 基因全长ORF克隆牛乙酰辅A羧化合成(ACC)免疫试剂盒现货供应

人 COMP / THBS5 基因全长ORF克隆牛乙酰辅A(acetyl-CoA)免疫试剂盒*直销

IGF-IR/InsR和ALK抑制剂（GSK1838705A）过氧化氢酶测定试剂盒(紫外法)  100管/96样  Catalase (CAT) assay kit (Ultraviolet)马铃薯葡萄糖琼脂（USP）平板  9cm*10

细胞丙二醛测定试剂盒(微板法)  400T  Cell Malondialdehyde (MDA) assay kit (Colorimetric method)5g 乙酸－ 1 －萘脂 1-Naphthyl Acetate 室温保存

总超氧化物歧化酶测定试剂盒(WST-1法)  48T|96T  Superoxide Dismutase (SOD) assay kit (WST-1 method)50T 破伤风芽孢梭菌PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

植物丙二醛测定试剂盒(微板法)  48T  Plant Malondialdehyde (MDA) assay kit (Colorimetric method)100 mg DiOC6（3） 化物 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

超氧化物歧化酶分型测试盒(羟胺法)[测Cu-Zn、Mn、总]  100管/48样|50管/24样  Superoxide Dismutase (SOD) typed assay kit (Hydroxylamine method)250mL Borate Buffer（硼酸盐缓冲液），0.5M,pH9.5  Borate Buffer，0.5M,pH9.5  常温保存

微量丙二醛测定试剂盒(TBA法)  100管/48样|50管/24样  Microscale Malondialdehyde (MDA) assay kit (TBA method)5次 97孔板PCR片段纯化回收试剂盒（离心法） 96 Microwell Plate PCR Clean-Up Kit 常温

丙二醛测定试剂盒(TBA法)  50管/48样|100管/96样  Malondialdehyde (MDA) assay kit (TBA method)2 ug pGL2 -basic pGL2 -basic 低温运输，-20℃保存

总超氧化物歧化酶测试盒(羟胺法)  100管/96样|50管/48样  Total Superoxide Dismutase (T-SOD) assay kit (Hydroxylamine method)沙氏葡萄糖肉汤（usp） Sabouraud-dextrose Broth 250g

肌酐测定试剂盒(肌氨酸氧化酶法)(微板法)  96T  Creatinine (Cr) Assay kit ( sarcosine oxidase )1瓶 Hela P10s-11F细胞株 Hela P10s-11F 低温运输和保存

甘油含量测试盒(组织)(微量酶标法)  100T  Glycerol Assay Kit李氏增菌肉汤LB2 Listeria Enrichment Broth 10ml*20支/包

类风湿因子测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)  R1：40ml×1 R2：10ml×1  Rheumatoid factor Assay Kit1瓶 ZR75-1细胞株 ZR75-1 低温运输和保存