培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数：

商品详细介绍：

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

科罗索酸

英文名：   Corosolic Acid

英文别名：   2-alpha- hydroxyursolic acid；(2a,3b)-2,3-Dihydroxy-urs-12-en-28-oic acid

CAS登录号：   4547-24-4

分子式：   C30H48O4

三叶豆紫檀苷

英文名：   Trifolirhizin

英文别名：   (-)-Maackiain-3-Oglucoside; [(6aR,12aR)-6a,12a-Dihydro-6H-[1,3]dioxolo[5,6]benzofuro[3,2-c][1]benzopyran-3-yl]β-D-glucopyranoside

CAS登录号：   6807-83-6

分子式：   C22H22O10

高良姜素

英文名：   Galangin

英文别名：   Norizalpinin；4H-1-Benzopyran-4-one, 3, 5, 7-trihydroxy-2-phenyl

CAS登录号：   548-83-4

分子式：   C15H10O5

胡萝卜苷

英文名：   Daucosterol

英文别名：   β-Daucosterin；β-Sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside

CAS登录号：   474-58-8

分子式：   C35H60O6

丁香酸

英文名：   Syringic acid

英文别名：   Syringate

CAS登录号：   530-57-4

分子式：   C9H10O5

花椒毒酚

英文名：   Xanthotoxol

CAS登录号：   2009-24-7

分子式：   C11H6O4

分子量：   202.16

琥珀酸

英文名：   Succinic acid

英文别名：   Amber acid

CAS登录号：   110-15-6

分子式：   C4H6O4

α-乳香酸

CAS登录号：   471-66-9

分子式：   C30H48O3

分子量：   456.70

分子结构：     

羟基酪醇

英文名：   Hydroxytyrosol

英文别名：   4-(2-Hydroxyethyl)-1,2-benzenediol；3,4-Dihydroxyphenylethanol

CAS登录号：   10597-60-1

分子式：   C8H10O3

奇任醇

英文名：   Kirenol

英文别名：   (1R,3S,4aS,4bS,7S,10aS)-1,2,3,4,4a,4b,5,6,7,9,10,10a-Dodecahydro-3-hydroxy-7-[(R)-1,2-dihydroxyethyl]-1,4a,7-trimethylphenanthrene-1-methanol

CAS登录号：   52659-56-0

分子式：   C2OH34O4

佛手柑内酯

英文名：   5-Methoxypsoralen

英文别名：   5-Methoxypsoralen、5-Methoxypsoralen; 4-Methoxy-7H-furo[3,2-g]chromen-7-one

CAS登录号：   484-20-8

分子式：   C12H8O4

p53-MDM2抑制剂(Nutlin 3)中性红染色液(1%)    50T 丁型肝炎病毒PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

中性红染色液(活细胞专用)  100ml  25g OPD 干粉 OPD，Powder 避光保存

中性红染色液(液泡系专用)  100ml  2 ug RNAi-Ready pSIREN-RetroQ RNAi-Ready pSIREN-RetroQ 低温运输，-20℃保存

中性红-甲基蓝染色液  100ml  1次 一步法96孔板单菌落质粒DNAout（真空法）  

橘黄G6染色液  100ml|500ml  2 ug pET-49b(+) pET-49b(+) 低温运输，-20℃保存

EA50染色液  100ml|500ml  CN琼脂平板  9cm*10

巴氏染色液(EA50)  4×100ml|4×250ml|4×500ml  Papanicolaou EA501瓶 AAV-293细胞株 AAV-293 低温运输和保存

EA36染色液  100ml|500ml  氯化钠蛋白胨缓冲液颗粒 Buffered Sodium Chloride Peptone Solution 250g

巴氏染色液(EA36)  4×100ml|4×250ml|4×500ml  Papanicolaou EA36100µg 人基因组DNA，女性 Human Genomic DNA 4℃保存

EA65染色液  100ml|500ml  500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.5   Phosphate Buffer，0.2M, pH7.5   常温保存

巴氏染色液(EA65)  4×100ml|4×250ml|4×500ml  Papanicolaou EA65100uL 小麦Zein基因PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存