细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：EGFR抑制剂(AZD3759)

英文名称：AZD3759

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7409

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

Human Herpesvirus 4 (HHV-4，同EB) )人疱疹病毒4型 LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CCR5/CD195  细胞表面趋化因子受体5抗体 规格: 0.1ml

Tellurite-resistant Escherichia coli 抗亚碲酸盐大肠杆（大肠埃希氏）O157:H7型 探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Cyclophilin B  亲环蛋白PPIB抗体 规格: 0.2ml

Cronartium ribicola松疱锈病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周BRD8  甲状激素受体共激活蛋白抗体 规格: 0.2mlNeuroligin 3  突触细胞粘附分子3抗体 规格: 0.2ml

Koi Herpesvirus(KHV)锦鲤疱疹病毒TK基因探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周FAM3B/PANDER  胰衍生因子抗体 规格: 0.2mlPRDX2/Peroxiredoxin-SO3  硫氧还蛋白过氧化物2 规格: 0.2ml

Chlamydia pneumoniae肺炎衣原体LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ENaCg/γENaC  上皮钠离子通道蛋白γ抗体 规格: 0.2mlLFABP/FABP-1  肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体 规格: 0.2ml

Erwinia amylovora梨火疫病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/HRP  辣根过氧化物标记的兔抗小鼠IgG-Fc 规格: 0.1mlAMFR/Gp78/RNF45  环指蛋白45/自分泌运动因子受体抗体 规格: 0.2ml

Influenza Virus A N3（AIV-N3）甲型流感（）病毒N3亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周ATGL  脂肪甘油三酯脂抗体 规格: 0.1mlRabbit Anti-rat IgM/PE  PE标记的兔抗大鼠IgM 规格: 0.1ml

Bordetella parapertussis副百日咳波氏杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CRLF2  胸基质淋巴细胞生成素受体抗体 规格: 0.2mlCathepsin S  组织蛋白S抗体 规格: 0.2ml

Paracoccus denitrificans脱氮副球探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周FMRP/FMR1  脆性X智力低下蛋白抗体 规格: 0.2mlMCP1/CCL2  单核细胞趋化蛋白1抗体 规格: 0.1ml

Cronartium conigenum松球果锈病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-HDAC8(Ser39)  磷酸化组蛋白去乙酰化8抗体 规格: 0.1mlDAP-5/p97  死亡相关蛋白5抗体 规格: 0.1ml

EGFR抑制剂(AZD3759)多种激酶抑制剂（Flumatinib）

SGLT2抑制剂(Bexagliflozin)

MET/AXL/MER和FGFR1/2/3抑制剂（S49076）

碱性磷酸酶抑制剂（(-)-p-Bromotetramisole oxalate）

SUV420H1和SUV420H2化学抑制剂（A-196）

CBP/EP300bromodomains抑制剂(CPI-637)

p97抑制剂(ML240)

PI3Kδ和PI3Kγ抑制剂(Tenalisib)

Hsp90抑制剂（PF-04929113）

src家族抑制剂（1-Naphthyl PP1 hydrochloride）

mTOR抑制剂(CZ415)