培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数：

商品详细介绍：

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

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G蛋白偶联Rho GEFs抑制剂(Y16)mTOR抑制剂（GDC-0349）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  GDC-034920 μl ER-Tracker Red（内质网红色荧光探针） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

KDM2/7JmjC亚家族抑制剂（Daminozide）  1mL(10mM)|1g|5g  Daminozide500mL Borate Buffered Saline，5X, pH7.0  Borate Buffered Saline，5X, pH7.0  常温保存

DU-145/PC-3细胞增殖抑制剂(Formononetin)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg  Formononetin1次 96孔板PCR片段纯化回收试剂盒（真空法）  

CDK1，2，4抑制剂（R547）  1mL(10mM)|10mg|100mg  R5472 ug pGL2-control pGL2-control 低温运输，-20℃保存

Ras-Raf相互作用抑制剂(Kobe0065)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg  Kobe006510号培养基（USP）  250g

微管蛋白聚集强效抑制剂（Lexibulin）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  Lexibulin1瓶 HeLa S3 [HeLaS3]细胞株 HeLa S3 [HeLaS3] 低温运输和保存

微管组装和DNA拓扑异构酶II抑制剂（Podophyllotoxin）  1mL(10mM)|100mg|500mg  Podophyllotoxin50次 柱式细菌DNAout（含） Column Bacterial DNAOUT 常温保存(需要-20℃保存)

c-Met抑制剂（JNJ-38877605）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  JNJ-38877605100U DNA 促旋（E. coli ） DNA Gyrase（E.coli） -20℃保存

PKC激活剂（Ingenol）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  Ingenol100mL RNase-Free Sodium Acetate Solution（无RNase的乙酸钠溶液）,3M，pH7.0  RNase-Free Sodium Acetate Solution,3M，pH7.0  常温保存

突变型K-Ras G12C抑制剂（K-Ras G12C-IN-1）  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  K-Ras G12C-IN-11 管 JM107大肠杆菌 JM107 E.coli Strain -80℃保存

MGMT抑制剂（Lomeguatrib）  1mL(10mM)|10mg|50mg  Lomeguatrib2 ug pRL-TK pRL-TK 低温运输，-20℃保存