操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：SMYD3和MEKK2抑制剂(EPZ031686)

英文名称：EPZ031686

产品规格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7460

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽传染性支气管炎病毒流行株RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周DAB2  信号转导功能磷蛋白DAB2抗体 规格: 0.2mlcIAP1/RNF48  凋亡抑制因子1抗体 规格: 0.2ml

Hamster Leukemia Virus金黄地鼠白血病病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周RNF138  环指蛋白138抗体 规格: 0.2mlDNPK1  DNA依赖蛋白激催化亚基抗体 规格: 0.1ml

Cephalosporium maydis玉米晚枯病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-CDKN2A/P16 (Ser140)  磷酸化抑基因p16抗体 规格: 0.1mlphospho-APP/ABPP (Ser730)  磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体 规格: 0.1ml

Ostreid Herpesvirus Type 1（OsHV-1）牡蛎疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周GUSB/beta glucuronidase  β葡萄糖醛酸苷抗体 规格: 0.2mlTubulin-Beta  微管蛋白抗体（免疫组化用抗体）Tubulin β 规格: 0.1ml

Ostertagia lyrata竖琴奥斯特线虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-MLK3(Thr277/Ser281)  磷酸化丝/苏蛋白激MLK3抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-rat IgG/FITC  FITC标记的小鼠抗大鼠IgG 规格: 0.3ml

Bordetella parapertussis副百日咳波氏杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HBEX2/Bex1  脑组织表达X连锁蛋白1抗体 规格: 0.2mlPBK/TOPK  PDZ连接激/T-LAK细胞源蛋白激抗体 规格: 0.1ml

Ramulus cinnamomi桂枝染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周MMP-2  基质金属蛋白-2抗体 规格: 0.1mlphospho-NIFK/MKI67IP(Thr234)  磷酸化KI67相互作用蛋白抗体 规格: 0.1ml

Suid Herpesvirus-1(SuHV-1)猪疱疹病毒 I 型LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgM/PE-Cy7  PE-Cy7标记的羊抗小鼠IgM 规格: 0.1mlHCV-NS4a  丙型毒-NS4a抗体 规格: 0.1ml

Human Papillomavirus 18(HPV-18)人瘤病毒18 探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周OLFM3/Optimedin  嗅球蛋白3抗体 规格: 0.2mlVAM1/MPP6  棕榈酰化膜蛋白6抗体 规格: 0.2ml

Medulla tetrapanacis通草探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周phospho-VEGF receptor 2 (Tyr996)  磷酸化管内皮生因子受体2抗体 规格: 0.1mlProtein A  重组蛋白A抗体 规格: 0.1ml

SMYD3和MEKK2抑制剂(EPZ031686)PARP抑制剂(Rucaparib Camsylate)

DHPS抑制剂（GC7 Sulfate）

蛋白激酶C(PKC)抑制剂(LXS196)

ATM抑制剂（BAY-1895344 hydrochloride）

c-Myc抑制剂(Mycro 3)

非肽趋化因子受体激动剂（ZK756326 dihydrochloride）

MMP抑制剂（Incyclinide）

KDM1A/LSD1抑制剂（DDP-38003 trihydrochloride）

SINE抑制剂(Verdinexor)

Hsp90抑制剂（PU-H71 hydrochloride）

5α-reductase抑制剂（Epristeride）