细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：EGFR2/HER2抑制剂(Mubritinib)

英文名称：Mubritinib

产品规格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7857

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

麦角甾醇

英文名：   Ergosterol

英文别名：   ergosta-5,7,22-trien-3β-ol

CAS登录号：   57-87-4

分子式：   C28H44O

氧化槐果碱

英文别名：   Sophocarpidine; Sophocarpine N-oxide; (+)-Oxysophocarpine; (+)-Sophocarpine N-oxide; Oxysophocarpine; Sophocarpidin

CAS登录号：   26904-64-3

分子式：   C15H24N2O2

分子量：   364.36

豆甾醇

英文名：   Stigmasterol

英文别名：   Stigmasta-5,22-dien-3beta-ol; 94%; stigmasta-5,22-dien-3-beta-ol; 24-Ethylcholesta-5,22-dien-3beta-ol

CAS登录号：   83-48-7

分子式：   C29H48O

汉黄芩素

英文名：   Wogonin

英文别名：   5,7-Dihydroxy-8-methoxy-2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登录号：   632-85-9

分子式：   C16H12O5

胡麻属苷

CAS登录号：   117479-87-5

分子式：   Cl7H24O12

分子量：   420.3

分子结构：     

白蜡树素

英文名：   Dimethylfraxetin

英文别名：   O,O-dimethylfraxetin；6,7,8-trimethoxycoumarin; 2H-1-Benzopyran-2-one, 6,7,8-trimethoxy

CAS登录号：   6035-49-0

分子式：   C12H12O5

芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷

英文名：   Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside

英文别名：   Apigenin-7-glucoside; 4H-1-Benzopyran-4-one, 7-(β-D-glucopyranosyloxy)-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)

CAS登录号：   578-74-5

分子式：   C21H20O10

异甘草素

英文名：   Isoliquiritigenin

英文别名：   2',4,4'-Trihydroxychalcone

CAS登录号：   961-29-5

分子式：   C15H12O4

文多灵

英文名：   Vindoline

英文别名：   Vindoline free base;Bufexamacum; aspidospermidine-3-carboxylicacid,4-(acetyloxy)-6,7-didehydro-3-hydroxy-16-me;thoxy-1-methyl-,methylester,(2-beta,3-beta,4-beta,5-alpha,12-beta,19-alpha)

CAS登录号：   2182-14-1

分子式：   C25H32N2O6

白桦脂醇

英文名：   Betulin

英文别名：   Lup-20(29)-ene-3b,28-diol

CAS登录号：   473-98-3

分子式：   C30H50O2

羽扇豆醇

英文名：   Lupeol

英文别名：   Fagarasterol

CAS登录号：   545-47-1

分子式：   C30H50O

EGFR2/HER2抑制剂(Mubritinib)AO/EB双荧光染色试剂盒  100T  改良马丁液体培养基  250ml*20瓶

MDC染色液  2×1ml  2 ug pSTAT1-Luc pSTAT1-Luc 低温运输，-20℃保存

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)  100T  乳糖胆盐发酵培养基颗粒 Lactose Bile Broth 300ml/袋*10

醋酸洋红染色液  50ml|100ml  10次 克必隆eTS 超敏PCR法cDNA合成试剂盒  

硼酸洋红染色液  100ml  50mL Nickel Sulfate Solution（硫酸镍溶液）,0.5M  Nickel Sulfate Solution,0.5M  常温保存

肥大细胞染色液(醛品红-橙黄G法)  4×20ml|4×50ml  20次 即用型蓝白T载体D型（无启动子，有MCS） Instant Blue-White Vector T，Type D -20℃保存

肥大细胞染色液(阿利新蓝沙黄法)  3×50ml  2 ug pMKO.1-puro pMKO.1-puro 低温运输，-20℃保存

结晶紫MES溶液(0.1%,pH6.0)  100ml  酵母浸粉（进口） Yeast Extract Powder 250g

台盼蓝染色液(1%)  10ml|50ml  1瓶 SP2/0细胞株 SP2/0 低温运输和保存

中性红染色液(0.1%)  100ml  BPL琼脂 BPL Agar 250g

中性红染色液(0.5%)  100ml  2 ug pIRES2-AcGFP1 pIRES2-AcGFP1 低温运输，-20℃保存