操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:VEGFR抑制剂(Axitinib) 英文名称:Axitinib 产品规格:1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg 产品货号:BJ-01X7459 Axitinib是一种VEGFR抑制剂,高浓度时也抑制PDGFR,作用于VEGFR1,VEGFR2,VEGFR3和PDGFRβ,IC50分别为0.1nM,0.2nM,0.1-0.3nM和1.6nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :319460-85-0 别名:AG-013736 纯度:99.77% 分子量:386.47 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Eurytrema coelomaticum腔阔盘吸虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HIST1H2AH 组蛋白H2A/S抗体 规格: 0.2ml Influenza Virus B 乙型流感病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-GCN2 (Thr667) 磷酸化蛋白激GCN2蛋白抗体 规格: 0.1ml Thallus laminariae昆布LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Phospho-GCN2 (Thr899) 磷酸化蛋白激GCN2蛋白抗体 规格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgM/Cy3 Cy3标记的羊抗小鼠IgM 规格: 0.1ml Avian Encephalomyelitis Virus(AEV)禽脑脊髓炎病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周LDOC1/BCUR1 症亮拉链下调因子1抗体 规格: 0.2mlC17orf53 17号染色体开放阅读框53抗体 规格: 0.2ml Mycoplasma spp.支原体通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周Rabbit Anti-Mink IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗水貂IgG 规格: 0.1mlMIIP IGFBP2结合蛋白/迁移和侵润抑制蛋白抗体 规格: 0.2ml Ceratitis capitata地中海实蝇PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周BCAR1 抗雌激素耐药蛋白1 规格: 0.2mlGYG1 糖原蛋白1抗体 规格: 0.2ml 大豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-BRCA1(Ser988) 磷酸化易基因1抗体 规格: 0.1mlphospho-c-Jun(Thr91+Thr93) 磷酸化原基因c-Jun抗体 规格: 0.1ml Acinetobacter spp.不动杆属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-PAK4(Ser474)/PAK5(Ser602)/PAK6(Ser560) 磷酸化p21激活激4/5/6抗体 规格: 0.1mlPlexin A1 神经丛蛋白A1抗体 规格: 0.2ml Kobuvirus嵴病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周IL-15RA 白介素15受体α抗体 规格: 0.2mlLCEAH/ECHS1 链烯脂酰辅A水化抗体 规格: 0.1ml Feline Calicivirus(FCV)猫杯状病毒前病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 磷酸化粘附相关激抗体 规格: 0.1mlPhospho-Beta-Catenin (Ser552) 磷酸化β 连环素蛋白抗体 规格: 0.1ml VEGFR抑制剂(Axitinib)Na+-Ca2+exchanger抑制剂(SEA0400) Factor Xa抑制剂(Apixaban) DPP4抑制剂(Sitagliptin) FXa抑制剂(Rivaroxaban) Ang-(1-7)激动剂(AVE 0991) ACE抑制剂(Angiotensin 1-7) HMG-CoA reductase抑制剂 beta adrenergic receptor激动剂(Isoprenaline hydrochloride) NOX1/4抑制剂(GKT137831) HMG-CoA还原酶抑制剂(Lovastatin) myosin II抑制剂((-)-Blebbistatin)
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