操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:RSK抑制剂(LJH685) 英文名称:LJH685 产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg 产品货号:BJ-01X8029 LJH685是一种有效的选择性RSK抑制剂,抑制RSK1/2/3生物活性,IC50为4到13nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1627710-50-2 分子量:381.42 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 人 NKG7 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)免疫试剂盒*直销 人 SKP1 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子超家族15(TL1A/TNFSF15)免疫试剂盒进口、组装 人 GLYAT 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子γ(TNFγ)免疫试剂盒进口、分装 人 PTGES3 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子β(TNF-β)免疫试剂盒现货供应 人 UXT 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子α转化(TACE)免疫试剂盒*直销 人 AGTRAP 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体免疫试剂盒进口、组装 人 CHCHD2 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫试剂盒进口、分装 人 B3galt5 基因全长ORF克隆人肿瘤关联钙信号转导因子2(TACSTD2)免疫试剂盒现货供应 人 INA 基因全长ORF克隆人中性内肽/脑啡肽(NEP)免疫试剂盒*直销 人 SCARA5 基因全长ORF克隆人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)免疫试剂盒进口、组装 人 TRIP6 基因全长ORF克隆人中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)免疫试剂盒进口、分装 RSK抑制剂(LJH685)delta opioid受体激动剂([D-Ala2]leucine-enkephalin) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg [D-Ala2]leucine-enkephalin2 ug pLOX-Ttag-iresTK pLOX-Ttag-iresTK 低温运输,-20℃保存 胱天蛋白酶抑制剂(Biotin-VAD-FMK) 1mL(10mM)|1mg|5mg Biotin-VAD-FMK醛类中和剂管 9ml*20 EGFR抑制剂(RG14620) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg RG146201瓶 MA-891细胞株 MA-891 低温运输和保存 B-Raf和c-Raf抑制剂(B-Raf IN 1) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg B-Raf IN 1普通琼脂 Nutrient Agar 250g DNA拓扑异构酶II抑制剂(Ellipticine hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Ellipticine hydrochloride1mg 磷脂 A2 Phospholipase A2 4℃保存 HCT-15细胞增殖抑制剂(Kinetin riboside) 1mL(10mM)|100mg Kinetin riboside25mL TBE Sample Buffer,6X TBE Sample Buffer,6X 常温保存 激酶抑制剂(2,4-Pyrimidinediamine) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 2,4-Pyrimidinediamine with linker100次 包涵体蛋白溶解及复性套装 Inclusion Body Protein Solubilization & Refolding Pack 常温保存 HDAC抑制剂(Oxamflatin) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg Oxamflatin2 ug pSUPER-basic pSUPER-basic 低温运输,-20℃保存 MEK抑制剂 1mL(10mM)|5mg|10mg MEK inhibitor100mL 酸 Acidic Phenol 常温避光保存 PI3K抑制剂(PF-4989216) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PF-49892162 ug pCMV-TK-Luc + pCMV-TK-Luc + 低温运输,-20℃保存 HAA抑制剂(MKC9989) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg MKC9989素B(1万单位) Polymyxin B 1万单位*5支
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