培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数: 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | Akt抑制剂(PF-AKT400) | PF-AKT400 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | BJ-01X8028 |
商品详细介绍: PF-AKT400是一种有效的,ATP竞争性的选择性Akt抑制剂,对PKBα(IC50=0.5nM)的选择性比PKA(IC50=450nM)高900倍。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! CAS号:1004990-28-6 别名:AKT protein kinase inhibitor 纯度:98.02% 分子量:400.43 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点: 1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 人 KLF5 基因全长ORF克隆人周期素依赖性激5(CDK5)免疫试剂盒进口、组装 人 TAL1 基因全长ORF克隆人周期素依赖性激4(CDK-4)免疫试剂盒进口、分装 人 MSX1 基因全长ORF克隆人肿瘤相关抗原(TAA)免疫试剂盒现货供应 人 ASCL1 基因全长ORF克隆人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)免疫试剂盒*直销 人 DCTN5 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子诱导基因6蛋白(TNFAIP6)免疫试剂盒进口、组装 人 SEC11A 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)免疫试剂盒进口、分装 人 MED28 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体3(TRAIL-R3)免疫试剂盒现货供应 人 TIPRL 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2/DR5)免疫试剂盒*直销 人 GOSR1 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)免疫试剂盒进口、组装 人 KCNE4 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)免疫试剂盒进口、分装 人 PPIL1 基因全长ORF克隆人肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)免疫试剂盒现货供应 Akt抑制剂(PF-AKT400)CYP3A4/5抑制剂配体(Veledimex) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg Veledimex25mL Tricine-SDS Sample Buffer,2X), reducing Tricine-SDS Sample Buffer,2X), reducing 常温保存 IDO抑制剂(IDO-IN-6) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg IDO-IN-6100µL 小鼠抗c-Myc标签单抗 Anti c-Myc-Tag Mouse MAb -20℃保存 肉碱棕榈酰转移酶1抑制剂(Perhexiline maleate) 1mL(10mM)|5mg|10mg Perhexiline maleate2 ug PT2/GFP PT2/GFP 低温运输,-20℃保存 腺苷受体激动剂(NECA) 1mL(10mM)|5mg|10mg NECA100mL RNase-free PVP K30溶液,20% 常温 CYP1A1抑制剂(TMS) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg TMS2 ug pCYB 1 pCYB 1 低温运输,-20℃保存 GRK抑制剂(CCG215022) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg CCG215022产芽孢肉汤 Sporulation Broth 250g p18抑制剂(NSC23005 sodium) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg NSC23005 sodium5g D- 核糖 D-Ribose 4℃保存 PARP-1抑制剂(NMS-P118) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg NMS-P11850T 炭疽杆菌PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 细胞增殖抑制剂(F16) 1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg F16100mg SMT(iNOS抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 dipeptidyl peptidase II抑制剂 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg UAMC00039 dihydrochloride250mL Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and EGTA (GVBMG) Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and EGTA (GVBMG) 常温保存 CYP1A酶抑制剂(Diosmetin) 1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg Diosmetin10uL HRP标记的抗抗体 Anti Biotin Ab,HRP 4℃保存
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