中文名称：RET激酶抑制剂(AST 487)

英文名称：AST 487

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7855

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

脱水长春碱

英文别名：   3',4'-Didehydroisoleurosine

CAS登录号：   38390-45-3

分子式：   C46H56N4O8

分子量：   792.96

长春碱

英文名：   vinblastine

英文别名：   Vincaleukoblastine；VLB

CAS登录号：   865-21-4

分子式：   C46H58N4O9

硫酸司巴丁

英文别名：   Siarczansparteiny

CAS登录号：   299-39-8

分子式：   C15H28N2O4S

分子量：   332.46

高乌甲素

英文名：   Lannaconitine

英文别名：   Aconitane-4,8,9-triol, 20-ethyl-1,14,16-trimethoxy-, 4-(2-acetylamino)benzoate, (1-alpha,14-alpha,16-beta)

CAS登录号：   32854-75-4

分子式：   C32H44N2O8

去甲斑蝥酸

分子量：   186.16

CAS登录号：   新品待定

分子结构：     

外观：   白色粉末

苔黑酚葡萄糖苷

英文名：   Orcinol glucoside

英文别名：   1-O-α-D-glucopyranosyl-3-hydroxy-5-methylbenzene

CAS登录号：   21082-33-7

分子式：   C13H18O7

氧代川南亭碱

分子量：   323

CAS登录号：   新品待定

分子结构：     

规格：   20 mg/支

升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷

CAS登录号：   256925-92-5

分子式：   C35H52O9

分子量：   616.78

分子结构：     

黄独素B

英文名：   Diosbulbin B

CAS登录号：   20086-06-0

分子式：   C19H20O6

分子量：   344.36

桑辛素

英文名：   Morusin

英文别名：   4H,8H-Benzo(1,2-B:3,4-B’)dipyran-4-one, 2-(2,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-8,8-dimethyl-3-(3-methyl-2-butenyl)

CAS登录号：   62596-29-6

分子式：   C25H24O6

白绵马素AA

英文别名：   ,5-Cyclohexadien-1-one,2,2'-methylenebis[6-acetyl-3,5-dihydroxy-4,4-dimethyl-

CAS登录号：   3570-40-9

分子式：   C21H24O8

分子量：   404.15

RET激酶抑制剂(AST 487)细胞脂质染色试剂盒  1000T|5000T  250g D- 果糖 D-Fructose   室温干燥保存

细胞膜完整性检测试剂盒  500T  50T 汉坦病毒Ⅰ型PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

细胞膜染色试剂CM-Dil  200μl  30µL β-Tubulin小鼠单抗 β-Tubulin Mouse MAb -20℃保存

细胞膜染色试剂DiO  500μl  2 ug YFP-tubulin YFP-tubulin 低温运输，-20℃保存

细胞膜染色试剂盒(PKH67)  500T  2mL 羧基磁珠 Magnetic beads,Carboxylic 4℃密闭、竖直保存

革兰氏菌染色鉴定试剂盒(Brown-Brenn)  100次  Brown-Brenn Staining Kit100mL TE Buffer,100X,pH7.4 TE Buffer,100X,pH7.4 常温保存

革兰氏菌染色鉴定试剂盒(Brown-Hopp)  100次  Brown-Hopp Staining KitTSA表面接触皿7.5cm  10个/包

Taylor改良Brown-Brenn革兰法细菌染色试剂盒  100次  1瓶 BIU-87细胞株 BIU-87 低温运输和保存

Hoechst33258染色液  10ml|50ml  Hoechst33258 Staining Solution阪崎肠杆菌显色培养基（DFI琼脂）  200g

Hoechst33258染色液(1mg/ml)  1ml|5×1ml  Hoechst33258 Staining Solution(1mg/ml)100U 热启动Taq DNA聚合 Hot Start Taq DNA Polymerase -20℃保存

Hoechst33342染色液  10ml|50ml  Hoechst33342 Staining Solution250mL Para-formaldehyde-Glytaraldehyde in Bicarbonate Buffer   Para-formaldehyde-Glytaraldehyde in Bicarbonate Buffer   常温保存

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)