中文名称：不可逆抑制剂(Pentostatin)

英文名称：Pentostatin

产品规格：1mL(10mM)|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7285

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Duck Hepatitis B Virus(DHBV)鸭乙型肝炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HMG14/HMGN1  高迁移率核小体结合蛋白1 规格: 0.1mlGoat Anti-human IgM/AP  碱性磷酸（AP）标记的羊抗人IgM 规格: 0.1ml

Herba taxilli桑寄生LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周MAP-9  微管相关蛋白9抗体 规格: 0.2mlATXN7L3B  共济失调7样蛋白3B抗体 规格: 0.2ml

Bovine Herpes Mammillitis Virus(BHMV)牛疱疹炎病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周TACC1  、胃抗原GA55抗体 规格: 0.2mlATG3  自噬相关蛋白3抗体 规格: 0.1ml

Histoplasm spp.组织胞浆通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HIV p55+P6-Gag  艾滋毒抗体 规格: 0.2mlFAM91A1  FAM91A1蛋白抗体 规格: 0.2ml

erwinia carotovora subsp atroseptica胡萝卜软腐欧文氏马铃薯黑胫亚种PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-CDK2 (Thr160)  磷酸化周期素依赖性激2抗体 规格: 0.1mlMCPIP1  单核细胞趋化诱导蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Fructus psoraleae补骨脂PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Monkey IgM/HRP  辣根过氧化物标记的兔抗猴IgM 规格: 0.1mlENPP1  核苷酸内焦磷酸/磷酸二酯1抗体 规格: 0.1ml

Cache Valley Virus(CVV)卡奇谷病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Integrin alpha 2b/CD41  小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗体 规格: 0.1mlCA13  碳酸酐 规格: 0.2ml

Chikungunya Virus(CHIKV)基孔肯尼雅病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.1mlPhospho-HSP27 (Ser82)  磷酸化热休克蛋白27抗体 规格: 0.1ml

Natrii sulfas染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Calpain 2  钙激活的中性蛋白2抗体 规格: 0.1mlATG18/WIPI1  自噬相关蛋白18抗体 规格: 0.2ml

Erysipelothrix spp丹毒丝属通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Mouse Anti-Goat IgG  小鼠抗羊IgG 规格: 1mgProteasome 20S C2  蛋白体PSMα1抗体 规格: 0.2ml

不可逆抑制剂(Pentostatin)糊精水溶液(1%)

苏丹黑B染色液

苏丹黑B染色液(细胞专用)

耐尔蓝染色液(Cain法)

改良油红O染色液

磷脂染色液(酸性苏木红法)

磷脂铁苏木素(FeH)染色液

姬姆萨染色液(Giemsa stain,即用型)

姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9)

姬姆萨染色液(10×Giemsa stain)

瑞氏染色液(Wright stain,即用型)

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)