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Akt和PDPK1双重抑制剂(PHT-427)
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Akt和PDPK1双重抑制剂(PHT-427)公司正在出售的产品:Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的羊抗豚鼠IgG 规格: 0.1mlCNKSR3 Ras激抑制因子连接增强蛋白3抗体 规格: 0.2mlMMP-26 基质金属蛋白-26抗体 规格: 0.2mlGPAM 线粒体甘油3磷酸酰基转移抗体 规格: 0.2mlUBF1 核仁转录因子1抗
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Akt和PDPK1双重抑制剂(PHT-427)

PHT-427

1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg

BJ-01X7880

商品详细介绍:

PHT-427是一种Akt和PDPK1双重抑制剂,与Akt和PDPK1中的PH结构域有亲和性,Ki分别为2.7μM和5.2μM。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

CAS号:1191951-57-1

纯度:98.24%

分子量:409.61

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
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实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

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DUSP21 基因全长ORF克隆猪骨形成蛋白2(BMP-2)免疫试剂盒进口、分装

SLMO1 基因全长ORF克隆猪骨特异性碱性B(ALP-B)免疫试剂盒现货供应

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Akt和PDPK1双重抑制剂(PHT-427)异染颗粒染色液(改良Albert法)  2×20ml|2×50ml  1 管 TH1大肠杆菌 TH1 E.coli Strain -80℃保存

立克次体染色液(改良Macchiavello法)  3×50ml  2 ug pSecTag2/Hygro A pSecTag2/Hygro A 低温运输,-20℃保存

钌红染色液  10ml  50次 土壤RNAout Soil RNAOUT 4℃保存

鞭毛染色液(Loffler法)  2×50ml  100mL MOBS Buffer,0.2M,pH7.4   MOBS Buffer,0.2M,pH7.4   常温保存

麻风杆菌染色液(改良Wade-Fite法)  3×50ml  不完全琼脂培养基 Incomplete Agar Medium 250g

鞭毛染色液(Cerares-Gill法)  2×50ml  100mg 制 Nystatin -20℃保存

芽孢晶体染色液  50ml  50T 通用型H1-H15亚型PCR试剂盒  低温运输,-20℃保存

线虫活体染色液(多色蓝法)  50ml|100ml  50 μg Mito-Tracker Green(线粒体绿色荧光探针) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

线虫活体染色液(地衣红法)  2×50ml  100mL CAPS Buffer,0.5M,pH9.0  CAPS Buffer,0.5M,pH9.0  常温保存

线虫活体染色液(碘法)  100ml  100mL Denhardt溶液,50×(非同位素用) Denhardt Solution, 50× -20℃保存

甲基绿-派络宁染色液  50ml|100ml  2 ug pGL4.37[luc2P/ARE/Hygro] pGL4.37[luc2P/ARE/Hygro] 低温运输,-20℃保存

 


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